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miRNA熒光定量檢測試劑盒

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更新時間:2018-06-13 14:35:51瀏覽次數:352次

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產品簡介

miRNA熒光定量檢測試劑盒本試劑盒采用 SYBR Green I 嵌合熒光染料法的原理來進行miRNA熒光定量PCR檢測。本產品是專門為miRNA定量檢測而研發的新一代預混形式的熒光定量PCR檢測試劑。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR增強劑等所有PCR所需要的成分;所含的熒光染料SYBR Green I 可以與所有的雙鏈DNA

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miRNA熒光定量檢測試劑盒

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miRNA熒光定量檢測試劑盒

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本試劑盒采用 SYBR Green I 嵌合熒光染料法的原理來進行miRNA熒光定量PCR檢測。本產品是專門為miRNA定量檢測而研發的新一代預混形式的熒光定量PCR檢測試劑。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR增強劑等所有PCR所需要的成分;所含的熒光染料SYBR Green I 可以與所有的雙鏈DNA結合,使該產品可用于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標記探針;其中的Taq DNA polymerase是經化學修飾的高效熱啟動酶,配合*的緩沖體系,使反應特異性更好,靈敏度更高,并能在更廣的范圍內對miRNA進行準確定量。它具有下列特點:

1.   簡便、快捷完成miRNA的提取與檢測。

2.   檢測通量高,只需少的RNA樣本,即可同時進行多種目標miRNA的檢測。

3.   檢測特異性好,*的miRNA引物設計技術及其優化的反應體系避免了非特異

      性擴增、特別是Pre-miRNA的污染 。

4.   檢測分辨率高:該系統能分辨單堿基差異的miRNA。

5.   檢測靈敏度高:可在低至pg級的總RNA中檢測到特異表達的miRNA。

RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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