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酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞制備試劑盒

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更新時間：2018-06-14 13:23:52瀏覽次數(shù)：280次

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產(chǎn)品簡介

酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞制備試劑盒本酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞制備試劑是一種通過化學處理，高效快速制備酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞，用于長期凍存以備后續(xù)轉(zhuǎn)化的產(chǎn)品，它具有下列特點：
1. 一次制備，-80℃保存，多次使用。

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酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞制備試劑盒

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酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞制備試劑盒	20次	詢價

本酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞制備試劑是一種通過化學處理，高效快速制備酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞，用于長期凍存以備后續(xù)轉(zhuǎn)化的產(chǎn)品，它具有下列特點：

1. 一次制備，-80℃保存，多次使用。

2. 操作簡單，單溶液制備，除酵母培養(yǎng)的時間外，整個操作只需要10分鐘。

3. 試劑盒含高效轉(zhuǎn)化液，即開即用。

4. 得到的感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率在0.2-1×105個轉(zhuǎn)化子/ μg質(zhì)粒DNA。

5. 適用于各種實驗用酵母菌株，包括S. cerevisiae、C. albicans、S. pombe、Pichia pastoris等。也可用于攜帶有選擇性質(zhì)粒的酵母。

6. 得到的感受態(tài)細胞可即刻轉(zhuǎn)化各種線性或環(huán)狀酵母穿梭質(zhì)粒，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。

7. 可以用于定點突變（Site－Directed Mutagenesis）、基因破壞（Gene Disruption）、等位突變基因修復（Mutant Allele Recovery）、酵母雙雜交系統(tǒng)等實驗。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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