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一站式平末端克隆試劑盒

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更新時間：2018-06-14 13:45:38瀏覽次數：298次

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產品簡介

一站式平末端克隆試劑盒基因片段用 Pfu 等DNA聚合酶擴增得到的產物為平末端，直接克隆比較困難。做 T/A 克隆時，需要在其末端添加單個堿基 A。本試劑盒提供了在平端添加單個 A 所需的所有試劑，大大方便后續的 T/A 克隆及序列分析。它具有下列特點：
1. 適用范圍包括：由高保真 DNA聚合酶如 Pfu、Pwo 、DeepVent等擴增而來的 PCR 產物；一些限制性內切酶如 EcoRV 、

詳細介紹

一站式平末端克隆試劑盒

名稱	規格	價格	手冊
一站式平末端克隆試劑盒	20次	490元

基因片段用 Pfu 等DNA聚合酶擴增得到的產物為平末端，直接克隆比較困難。做 T/A 克隆時，需要在其末端添加單個堿基 A。本試劑盒提供了在平端添加單個 A 所需的所有試劑，大大方便后續的 T/A 克隆及序列分析。它具有下列特點：

1. 適用范圍包括：由高保真 DNA聚合酶如 Pfu、Pwo 、DeepVent等擴增而來的 PCR 產物；一些限制性內切酶如 EcoRV 、SmaI等酶切產生的 DNA段；粘端 DNA用DNA聚合酶補平后的片段。

2. 可以在任何平末端DN片段兩端分別補上單個脫氧腺嘌呤 A，間接將 PCR產物克隆到 T 載體上。

3．操作快速，5 分鐘就可以完成。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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