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上海聯邁生物工程有限公司
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菌落PCR試劑盒2.0本產品可用于不經過E.coli培養和質粒提取而直接從轉化子中篩選重組子，其原理是直接利用E.coli菌落作為PCR模板，以識別載體質粒或/和插入片段順序的寡核苷酸為引物對重組子進行篩查，通過PCR產物的有無和片段的大小來判斷外源DNA片段是否被成功克隆到載體質粒之中，使用本產品可以使質粒鑒定過程從兩天縮短到幾小時。
菌落PCR試劑盒2.0
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
菌落PCR試劑盒2.0 | 50次 | 詢價 |
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本產品可用于不經過E.coli培養和質粒提取而直接從轉化子中篩選重組子，其原理是直接利用E.coli菌落作為PCR模板，以識別載體質?；?和插入片段順序的寡核苷酸為引物對重組子進行篩查，通過PCR產物的有無和片段的大小來判斷外源DNA片段是否被成功克隆到載體質粒之中，使用本產品可以使質粒鑒定過程從兩天縮短到幾小時。
1. 簡單快速，用戶只需要提供PCR引物和E.coli菌落，不需要細菌培養和質粒提取，整個篩選過程從一天縮短到2-3小時，節約時間和成本。本產品與常用E.coli菌株和載體兼容。既可小規模篩選，也適用于大規模篩查。
2. 高靈敏度，既可用于高拷貝質粒，也適合于低拷貝質粒。
3. 高特異性，本產品采用了十分有效的辦法控制了培養基上殘留質粒對PCR的影響，使假陽性率低于5%，而絕大部分同類產品的十分容易出現假陽性。
4. PCR反應體系中含有惰性電泳染料，反映完成后可直接上樣電泳，不需另加上樣液。
5. 處理過的菌落樣品低溫長期保存后仍能用于PCR篩查。
6. 性價比高，價格更質粒提取試劑相當，但節約一天時間。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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