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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-06-14 15:10:00瀏覽次數(shù)：428次
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C43（DE3）大腸桿菌C43（DE3）來源于C41（DE3）菌株，相比于C41（DE3），C43（DE3）具有更高的毒蛋白表達水平。菌株能夠有效表達來源于各物種包括細菌，酵母，植物，病毒和動物等多個物種的有毒蛋白。C41（DE3）來源于BL21（DE3）。該宿主菌含有一個基因突變，能夠降低T7 RNAP的酶活力，所以能夠阻止過表達重組表達有毒蛋白的細胞死亡。C41（DE3）是λDE3的溶源性菌株
C43(DE3)大腸桿菌
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
C43(DE3)大腸桿菌 | 1 管 | 詢價 |
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C43（DE3）來源于C41（DE3）菌株，相比于C41（DE3），C43（DE3）具有更高的毒蛋白表達水平。菌株能夠有效表達來源于各物種包括細菌，酵母，植物，病毒和動物等多個物種的有毒蛋白。C41(DE3)來源于BL21(C43(DE3)大腸桿菌DE3)。該宿主菌含有一個基因突變，能夠降低T7 RNAP的酶活力，所以能夠阻止過表達重組表達有毒蛋白的細胞死亡。C41(DE3)是λDE3的溶源性菌株，在lacUV5啟動子的下游含有一個T7 RNA聚合酶基因，適合表達克隆于T7啟動子表達載體上的基因。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，C43(DE3)大腸桿菌離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
C43(DE3)大腸桿菌相關(guān)產(chǎn)品列表：
堿性磷酸酶，牛小腸
蝦堿性磷酸酶
無機焦磷酸酶，熱穩(wěn)定
無機焦磷酸酶（酵母）
三磷酸腺苷雙磷酸酶
ATP硫酸化酶
大腸桿菌DNA連接酶（E.coli Ligase）
T4 DNA連接酶（T4 DNA Ligase)
T4 DNA連接酶（T4 DNA Ligase)
Taq DNA 連接酶（Taq DNA Ligase)
9°N DNA 連接酶（9°N DNA Ligase)
T4 RNA連接酶（T4 RNA Ligase)
T4 RNA連接酶 1（T4 RNA Ligase 1)
T4 RNA 連接酶 2 （雙鏈RNA連接酶 ）
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