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C43（DE3）大腸桿菌

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更新時間：2018-06-14 15:10:00瀏覽次數：432次

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產品簡介

C43（DE3）大腸桿菌C43（DE3）來源于C41（DE3）菌株，相比于C41（DE3），C43（DE3）具有更高的毒蛋白表達水平。菌株能夠有效表達來源于各物種包括細菌，酵母，植物，病毒和動物等多個物種的有毒蛋白。C41（DE3）來源于BL21（DE3）。該宿主菌含有一個基因突變，能夠降低T7 RNAP的酶活力，所以能夠阻止過表達重組表達有毒蛋白的細胞死亡。C41（DE3）是λDE3的溶源性菌株

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C43(DE3)大腸桿菌

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C43(DE3)大腸桿菌	1 管	詢價

C43（DE3）來源于C41（DE3）菌株，相比于C41（DE3），C43（DE3）具有更高的毒蛋白表達水平。菌株能夠有效表達來源于各物種包括細菌，酵母，植物，病毒和動物等多個物種的有毒蛋白。C41(DE3)來源于BL21(C43(DE3)大腸桿菌DE3)。該宿主菌含有一個基因突變，能夠降低T7 RNAP的酶活力，所以能夠阻止過表達重組表達有毒蛋白的細胞死亡。C41(DE3)是λDE3的溶源性菌株，在lacUV5啟動子的下游含有一個T7 RNA聚合酶基因，適合表達克隆于T7啟動子表達載體上的基因。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，C43(DE3)大腸桿菌離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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