Thermo F1 量程可調(diào)單通道移液器1 to 10μL 分子生物試劑
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更新時間：2018-06-14 15:12:15瀏覽次數(shù)：530次
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DH10Bac大腸桿菌DH10Bac用來生產(chǎn)用于真核細胞蛋白表達的重組桿狀病毒分子。DH10Bac菌株包含親本Bacmid的 bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個mini-F復制子、卡那抗性基因、Tn7位點和lacZα-互補因子。att輔助質(zhì)粒包含tns ABCD區(qū)域，該區(qū)域提供了 mini-Tn7從供體質(zhì)粒插入親本Bacmid靶位點所需要的轉(zhuǎn)座蛋白。DH
DH10Bac大腸桿菌
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
DH10Bac大腸桿菌 | 1 管 | 詢價 |
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DH10Bac用來生產(chǎn)用于真核細胞蛋白表達的重組桿狀病毒分子。DH10Bac菌株包含親本Bacmid的 bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個mini-F復制子、卡那抗性基因、Tn7位點和lacZα-互補因子。att輔助質(zhì)粒包含tns ABCD區(qū)域，該區(qū)域提供了 mini-Tn7從供體質(zhì)粒插入親本Bacmid靶位點所需要的轉(zhuǎn)座蛋白。DH10Bac細胞中的 The φ80dlacZDM15基因的產(chǎn)物可以實現(xiàn)β-半乳糖苷酶的α-互補現(xiàn)象，用于重組bacmid的藍白斑篩選。DH10Bac含有卡那霉素和四環(huán)素抗性，而供體質(zhì)粒pFastbac含有慶大霉素抗性。制備DH10Bac感受態(tài)細胞時需要在培養(yǎng)時添加卡那霉素和四環(huán)素，而在制備桿粒時需要使用卡那霉素，四環(huán)素，慶大霉素的三抗平板。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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