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包涵體蛋白溶解及復性套裝

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更新時間:2018-06-15 13:36:23瀏覽次數:309次

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產品簡介

包涵體蛋白溶解及復性套裝用E.coli作為宿主表達得到的重組蛋白往往會形成包涵體,其中的重組蛋白質只完成部分折疊,還沒形成后的正確空間結構,所以沒有生物活性,要得到有活性的重組蛋白,還需要后續的溶解和復性(重折疊)處理。目前較常用的溶解包涵體的方法是用尿素,Sarkosyl,鹽酸胍等強變性劑,其缺點是包涵體中的重組蛋白質被*變性,使后續的蛋白質復性處理效率降低。本產品根據包涵體中的重組蛋白質已

詳細介紹

 

包涵體蛋白溶解及復性套裝

名稱

規格

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包涵體蛋白溶解及復性套裝

100次

1490元

 

用E.coli作為宿主表達得到的重組蛋白往往會形成包涵體,其中的重組蛋白質只完成部分折疊,還沒形成后的正確空間結構,所以沒有生物活性,要得到有活性的重組蛋白,還需要后續的溶解和復性(重折疊)處理。目前常用的溶解包涵體的方法是用尿素,Sarkosyl,鹽酸胍等強變性劑,其缺點是包涵體中的重組蛋白質被*變性,使后續的蛋白質復性處理效率降低。本產品根據包涵體中的重組蛋白質已經完成了部分折疊這一實事設計,具有下列特點:

1. 一站式,提供包涵體洗滌、溶解和蛋白質復性的所有試劑。

2. 采用溫和法溶解包涵體,釋放的包涵體蛋白質不*變性,還能保持其部分折疊的結構,使后續的復性處理效率提高。

3. 所用復性液基于稀釋復性,經過精心優化,有利于大部分蛋白的復性。

4. 還提供五種不同的添加劑,它們可以單獨加入復性液,也可以按一定比例進行自由組合,以適應不同的蛋白質折疊需求。 

5. 本試劑盒提供實惠的小規格,用于做預實驗用,用戶如果選擇到合適的溶液組合后,可以單獨購買其中的溶液以用于大量制備。

6. 本試劑盒足夠100次小規模(1 mL規模)的蛋白質復性實驗。

RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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