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上海聯邁生物工程有限公司
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鎳柱介質基于His-Ni親和層析的蛋白質純化方法是目前分離純化重組表達蛋白質的重要方法，其原理是用基因重組的方法使待純化蛋白的N端或C端攜帶一段His序列（一般是6個His），然后利用偶聯了Ni離子的瓊脂糖與His的親和作用而將His-標記蛋白與其他蛋白質分開，與Ni-瓊脂糖結合的蛋白后用咪唑溶液洗脫即可。本產品就是專門用于純化帶有His標記的蛋白質實驗，它具有下列特點：
鎳柱介質
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
鎳柱介質 | 2mL | 150元 |
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基于His-Ni親和層析的蛋白質純化方法是目前分離純化重組表達蛋白質的重要方法，其原理是用基因重組的方法使待純化蛋白的N端或C端攜帶一段His序列（一般是6個His），然后利用偶聯了Ni離子的瓊脂糖與His的親和作用而將His-標記蛋白與其他蛋白質分開，與Ni-瓊脂糖結合的蛋白后用咪唑溶液洗脫即可。本產品就是專門用于純化帶有His標記的蛋白質實驗，它具有下列特點：
1. 即開即用，非常方便。
2. 介質為交聯的瓊脂糖，可以反復使用。
3. Ni偶聯牢固，含有5個Ni螯合位點，Ni密度達到20-40 μmol/mL。
4. 結合量大，每mL介質可以結合20-30 mg的蛋白質。
5. 專一性強，一次過柱即可獲得純度高達95%的His-標記蛋白。
6. 有效pH范圍廣，在pH3-11之間均可使用。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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