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上海聯邁生物工程有限公司


考馬斯亮藍G-250

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更新時間:2018-06-15 14:34:03瀏覽次數:314次

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產品簡介

考馬斯亮藍G-250與蛋白質產生明顯的有顏色的復合物。可在膠內測定僅有0.5微克/平方厘米的蛋白。在酸性染色介質中形成的考馬斯亮藍的陰離子通過靜電作用結合蛋白質子化了的氨基基團;在合適的條件下所產生的復合物是可逆的。當溶解在pH為3.0的0.01M檸檬酸緩沖液中時,大吸收峰為555納米;只有染料時大吸收峰為549納米,蛋白-染料復合物的峰會比單純染料的峰略寬。

詳細介紹

 

考馬斯亮藍G-250

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考馬斯亮藍G-250

10g

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與蛋白質產生明顯的有顏色的復合物。可在膠內測定僅有0.5微克/平方厘米的蛋白。在酸性染色介質中形成的考馬斯亮藍的陰離子通過靜電作用結合蛋白質子化了的氨基基團;在合適的條件下所產生的復合物是可逆的。當溶解在pH為3.0的0.01M檸檬酸緩沖液中時,大吸收峰為555納米;只有染料時大吸收峰為549納米,蛋白-染料復合物的峰會比單純染料的峰略寬。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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