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一管式TMB顯色液A (可溶型)

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一管式TMB顯色液A (可溶型) 四甲基聯苯胺,即TMB(3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine),是辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)的顯色底物,在辣根過氧化物酶和H2O2存在時,TMB會產生可溶性藍色產物(光吸收在370 nm),加入硫酸后,溶液呈黃色,此時可以在450 nm測定吸光度,因此TMB和H2O2一起常用于檢測HRP的存在。跟

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一管式TMB顯色液A (可溶型) 

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一管式TMB顯色液A (可溶型) 

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四甲基聯苯胺,即TMB(3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine),是辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)的顯色底物,在辣根過氧化物酶和H2O2存在時,TMB會產生可溶性藍色產物(光吸收在370 nm),加入硫酸后,溶液呈黃色,此時可以在450 nm測定吸光度,因此TMB和H2O2一起常用于檢測HRP的存在。跟HRP的其他底物(如ABTS和OPD)相比,TMB不但靈敏,而且無毒,所以在ELISA中的應用日趨廣泛。一管式TMB顯色液A (可溶型) 傳統的TMB顯色試劑一般由兩組份組成(另一個是H2O2),必須在使用前新鮮配制,并且容易產生沉淀,使用相對不太方便,并且也容易導致操作誤差。為克服這些缺點,本公司開發了只有一個溶液的TMB顯色液,它具有下列特點:
1. 即開即用,操作簡單,用戶不需要配制任何溶液。
2. 顯色液只是單一溶液,簡化了操作步驟,降低了操作誤差,結果更加穩定。
3. 既可用于ELISA等的顯色液,也可以用于檢測血液或血紅蛋白等樣品中的過氧化物酶含量。
4. 該底物溶液含TMB、H2O2和特殊的穩定劑,可以在4℃長期放置。
5. 分沉淀可溶型(A型,適用于ELISA)和沉淀不可溶型(B型,適用于Western免疫檢測)兩種。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,一管式TMB顯色液A (可溶型) 離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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