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上海聯邁生物工程有限公司
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基因結構和功能研究產品基因的定點突變是重要的分子生物學技術，廣泛用于載體構建、基因改造、蛋白質功能研究等領域。但傳統的方法需要使用單鏈DNA模板，而得到單鏈DNA模板又需要先將基因克隆到類似M13這種載體中，操作過程冗長。為了克服這些缺點，本公司將突變位點設計到一對互補的引物中，用高保真DNA聚合酶擴增質粒模板，然后用Dpn I去除原始的甲基化模板，新合成的DNA通過互補形成帶切口的雙鏈質粒，直接
基因結構和功能研究產品
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
基因結構和功能研究產品 | 10次 | 詢價 |
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基因的定點突變是重要的分子生物學技術，廣泛用于載體構建、基因改造、蛋白質功能研究等領域。但傳統的方法需要使用單鏈DNA模板，而得到單鏈DNA模板又需要先將基因克隆到類似M13這種載體中，操作過程冗長。為了克服這些缺點，本公司將突變位點設計到一對互補的引物中，用高保真DNA聚合酶擴增質粒模板，然后用Dpn I去除原始的甲基化模板，新合成的DNA通過互補形成帶切口的雙鏈質粒，直接用于轉化感受態細菌。本產品具有下列特點：
1. 直接使用質粒DNA作為模板，免去了制備單鏈DNA的步驟。
2. 基于高保真PCR，對模板DNA序列沒特殊要求，可以用于突變任何序列。同時對模板的需求量很少。
3. 一管式，全部在一個優化的緩沖體系中完成，非常簡單。
4. 使用Dpn I去除未突變模板，突變效率高達90%。
5. 不需要連接步驟，反應結束后可以直接轉化。
6. 提供陽性對照質粒pUC19和突變引物，便于分析失敗原因。
7. 可用于制備點突變，缺失突變和插入突變。
8. 使用于從dam+細菌中純化的質粒（常用的宿主菌都是dam+），由于JM110和SCS110為dam-，所以從中提取的質粒不能用本產品制備突變。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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