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更新時(shí)間：2018-06-19 15:12:22瀏覽次數(shù)：322次
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DNA嵌套缺失試劑盒較常見的DNA嵌套缺失（Nested Deletion）方法是利用ExoⅢ等外切酶從線狀DNA的一端連續(xù)切除核酸，后環(huán)化得到可以轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒。該方法早由Henikoff在Putney的方法的基礎(chǔ)上發(fā)明，本產(chǎn)品是在Henikoff方法的基礎(chǔ)上改良而得，它具有下列特點(diǎn)：
1. 不需要使用超螺旋的質(zhì)粒和任何限制性內(nèi)切酶，非常皮實(shí)。
DNA嵌套缺失試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊 |
DNA嵌套缺失試劑盒 | 10次 | 3990元 |
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常見的DNA嵌套缺失（Nested Deletion）方法是利用ExoⅢ等外切酶從線狀DNA的一端連續(xù)切除核酸，后環(huán)化得到可以轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒。該方法早由Henikoff在Putney的方法的基礎(chǔ)上發(fā)明，本產(chǎn)品是在Henikoff方法的基礎(chǔ)上改良而得，它具有下列特點(diǎn)：
1. 不需要使用超螺旋的質(zhì)粒和任何限制性內(nèi)切酶，非常皮實(shí)。
2. 一站式，用戶只需要提供質(zhì)粒，不需要單獨(dú)準(zhǔn)備其他試劑。
3. 一管式，不需要任何純化和回收的處理。
4. 提供陽性對照質(zhì)粒，便于在遇到困難時(shí)分析原因。
5. 得到的片段可以用于側(cè)序和蛋白結(jié)合位點(diǎn)的分析等試驗(yàn)。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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