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Klenow 片段（3´→ 5´ exo-）

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產品簡介

Klenow 片段（3´→ 5´ exo-）Klenow 片段（3´→5´exo-）是大腸桿菌 DNA 聚合酶 I 的蛋白水解產物。它保留了DNA 聚合酶活性，但失去了 5´→3´ 外切核酸酶活性。該酶經突變（D424A）去除了其 3´→5´ 的外切核酸酶活性。
具體有下列特點：
1. 用隨機引物制備探針

詳細介紹

Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)

名稱	規格	價格	手冊
Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)	200U	詢價

Klenow 片段（3´→5´exo-）是大腸桿菌 DNA 聚合酶 I 的蛋白水解產物。它保留了DNA 聚合酶活性，但失去了 5´→3´ 外切核酸酶活性。該酶經突變（D424A）去除了其 3´→5´ 的外切核酸酶活性。
具體有下列特點：
1. 用隨機引物制備探針
2. 隨機引物Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)標記法
3. 合成 cDNA 第二鏈
4. 誘變反應中第二鏈的合成
5. 雙脫氧法 DNA 序列測定（Sanger 法）
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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