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抗原抗體反應主要特點及影響因素
2022-11-14 閱讀(1183)
抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發生的特異性結合反應。這種反應既可在機體內進行，也可以在機體外進行。特點有特異性、比例性、可逆性抗原抗體反應的過程是經過一系列的化學和物理變化，包括抗原抗體特異性結合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉為疏水膠體的變化。抗原抗體反應的特點主要有三性:即特異性、比例性、可逆性。特異性是抗原抗體反應的最主要特征，這種特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區之間空間結構的互補性確定的。
抗原抗體反應的主要特點：
1、特異性：特定的抗體只能與特定的抗原（肽段/蛋白）結合，這在WB一抗二抗的種屬及反應性的選擇常用到；
2、可逆性：抗原抗體的結合是非共價結合，在一定條件下這種非共價結合是可逆的；因此，同一NC膜/PVDF膜在Stripping（抗體洗脫）以后可以用來檢測其他蛋白；
3、比例性：抗原抗體在整個反應中存在一定的量比關系，只有當二者濃度比例適當時才出現可見反應；WB中蛋白上樣量和一抗二抗的稀釋比例與此有關，實際操作中抗體的量相對較多，這也是為何抗體可以反復使用的原因之一；
4、階段性：抗原抗體特異性反應分兩階段，第一階段反應迅速，第二階段反應緩慢，兩階段均為特異性結合；WB中抗原抗體結合在室溫下，反應1小時結合率可達95%，2小時可達97%以上；4℃在，反應4-6小時可達90%，8小時可達95%（本人忘記了具體的數值，但大致如此）。
影響抗原抗體反應的三因素：
1、電解質：抗原和抗體通常為蛋白質分子，等電點分別為pH 3～5和pH 5～6，在中性或:弱堿性的環境中，表面均帶負電荷，適當濃度的電解質會使他們失去一部分負電荷而相互結合，出現肉眼可見的凝集或沉淀現象：在抗原抗體反應中，常用0.85%的NaCI溶液或各種緩沖液作為抗原、抗體的稀釋液，以提供適當濃度的電解質。
2、溫度：抗原抗體反應必須在適宜的溫度中進行，一般為15～40℃，通常最適為37℃。一定范圍內，溫度升高，可促進抗原抗體分子問的碰撞機會，加速抗原抗體復合物的形成，加快可見反應的速度，若溫度高于56℃，可導致已結合的抗原抗體再解離，甚至變性或破壞；溫度越低，結合速度越慢，但結合牢固，易于觀察。某些特殊的抗原抗體反應，對反應溫度有特殊要求，如冷凝集素在4℃左右與紅細胞結合最好，20℃以上反而解離。3、
3、酸堿度：抗原抗體反應必須在合適的酸堿度環境中進行，pH過高或過低都將影響抗原:抗體的理化性質，抗原抗體反應的最適酸堿度為pH 6～8。此外，當pH達到或接近顆粒性抗原的等電點時，即使沒有相應抗體存在時，也會引起抗原非特異性凝集，即自凝，造成假陽性反應，嚴重影響試驗的可靠性。
