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PCR出現非特異性擴增帶原因與對策

2023-6-12  閱讀(1075)

PCR擴增后出現的條帶與預計的大小不一致,或大或小,或者同時出現特異性擴增帶 與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現,其原因:

1、引物與靶序列不wan全互補、或引物聚合形成二聚體。

2、Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低,及PCR循環次數過多有關。其次,是酶的質和量,往往一些來源的酶易出現非特異條帶而另一來源的酶則不出現,酶的量過多有時也會出現非特異性擴增。

其對策有:

①必要時,重新設計引物。

②減低酶的量或調換另一來源的酶。

③降低引物量,適當增加模板量,減少循環次數。

④適當提高退火溫度或采用二溫度點法(93℃變性,65℃左右退火與延伸,也叫兩步法)。



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