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上海博湖生物科技有限公司
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一種追蹤蛋白質的傳統方法
2020-2-25 閱讀(2033)
實驗涉及在短時間內用放射性前體標記細胞(脈沖，通常是在培養基中添加放射性的和/或半)，然后在蛋白質動力學過程中，在培養基中添加未標記的前體，細胞被允許恢復。隨著帶有標記前體的舊蛋白在細胞內被降解，使用未標記前體的新蛋白同時被合成。
這是一種追蹤蛋白質并估計其穩定性的傳統方法，除了涉及到處理放射性，這種方法在測量蛋白質半衰期時比其他藥理方法具有明顯的優勢，在實驗室中仍然經常使用。它不僅能測量蛋白質半衰期，而且如果你擅長放射自顯影和亞細胞分離，還可以追蹤蛋白質并確定其亞細胞定位。
在不同的時間點免疫沉淀蛋白質，用放射自顯影法測量樣品中的放射性。根據非放射性蛋白質取代放射性蛋白質的速度，可以確定任何蛋白質的半衰期。這種方法的另一種非放射性變異是zui近流行的bleach-chase(漂白追蹤)，具體方法是目的蛋白與熒光團融合，進而通過短暫的光脈沖來漂白，漂白促使標記蛋白分為了兩種亞群：熒光蛋白和非熒光蛋白，漂白后熒光恢復率與降解速率相關。
