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上海雅吉生物科技有限公司
主營產品： 培養原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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石蠟包埋組織蛋白提取試劑盒
2019-5-30 閱讀(472)
產品及特點
石蠟包埋組織是很重要的臨床材料，研究其正常細胞和疾病相關的細胞，特
別是癌細胞中標記蛋白的差異表達水平，對于判斷癌化的進展，癌癥的類型的判
定，以方便于診斷和治療有重要的意義，然而體外培養的細胞的蛋白差異表達水
平并不能夠真實反映體內細胞的真實狀況，因此從石蠟包埋組織中提取蛋白并且
加以研究有很重要的意義，本試劑盒通過特殊的快速脫蠟試劑和蛋白質抽提試
劑，在兩種不同的溫度條件下溫育，可以將被鉸鏈的蛋白質釋放出來，經過簡單
的離心步驟，上清中含有的蛋白經過沉淀洗滌和溶解后，可以用于Western
Blot 、SDS-PAGE、ELISA、2D電泳或蛋白質芯片分析等，本試劑盒可以使
用50次左右。 本產品有下列特點：
1. 不含有去污試劑，適用于非染色的標本。
2. 可以適用于甲醛浸泡的組織標本。
3. 不需要超速離心，可以同時處理多個標本。
規格及成分 成 分 編 號 小扁盒包裝
預處理試劑 A 130888A 100 mL
預處理試劑 B 130888B 5 mL
提取試劑 130888C 5mL
沉淀試劑 130888D 75mL
DTT 干粉 130888E 80mg
使用手冊 130888sc 1份
運輸及保存 常溫下運輸和保存，但 DTT 和提取試劑需要 4℃保存，盛裝預處理試劑 A 的瓶
子已經密封，請在使用后，將剩余的預處理試劑 A 倒入一個有內蓋的瓶中，同
時蓋緊內外蓋，以防止揮發。盛裝預處理試劑 A，B 和沉淀試劑的瓶蓋要蓋緊，
同時避免火源。
自備試劑 超純水
使用方法
1. 取兩塊大約10-15 μm厚，100 mm2石蠟包埋組織切片到1.5 mL 的干凈
離心管中，加入1mL 預處理試劑A，高速渦懸震蕩30 sec，室溫靜置5 min，
期間偶爾顛倒離心管數次。
2. 加入100 μL預處理試劑B，渦懸震蕩10 sec，再10000 rpm（10000 g）
離心2 min，移去上下兩層的液體。
3. 用500 μL的超純水清洗脫蠟的組織兩次，離心并盡量吸去液體，保留組織
塊沉淀。
4. 加入100μL提取試劑（用前需要將DTT全部加入到裝提取試劑的瓶中，搖晃
混勻，未用完的提取試劑需要4℃放置），蓋上蓋子，渦懸震蕩數秒。
5. 在水浴鍋中100℃加熱20 min，短暫離心一下，再用組織研磨棒將切片組
織磨碎。
6. 在水浴鍋中60℃加熱2 hour，期間大約每20 min取出，震蕩一次。
7. 4℃，12000 rpm（12830 g）離心15 min，小心將上清轉移到一個新的
1.5 mL 的干凈離心管中。注意：在上清中的蛋白質可以在4℃的環境條件
下保存一個星期，如果需要長期保存，請放置在-20℃的環境中，同時避免
反復凍溶，也可以使用我公司生產的非干擾型蛋白濃度測定試劑盒對上清中
的蛋白質直接定量。
8. 加入1 mL 的沉淀試劑，渦懸震蕩10 sec，在4℃的環境中保持10 min。
9. 4℃，12000 rpm離心15 min，去除上清，保留沉淀。
10. 加入0.5 mL的沉淀試劑，渦懸震蕩10 sec，在4℃的環境中保持10 min，
再4℃，12000 rpm離心15 min，去除上清， 保留沉淀，在通風櫥中將試
管倒置在濾紙上，讓殘余的液體揮發干凈。
11. 將固體沉淀溶解于合適的自備的緩沖液中，再4℃，12000 rpm 離心5
min，收集上清，用于SDS-PAGE，Western blot等實驗。注意：此上清
中含有DNA，RNA 殘留，所以溶液有些發粘，加入少量的micrococcal
nuclease，benzonase 等消化，有助于減少粘性，但是即使不處理一般不
會影響后續實驗，用槍頭將沉淀搗碎。建議使用含有Thiourea ，Urea，
NDSB-201 或其它強溶解能力的去污試劑的緩沖液有利于沉淀的*溶
解。
注意事項 1. 為提高石蠟包埋組織中蛋白質的回收效率，必須盡量減少在切片制作過程中
甲醛固定時間，同時在石蠟包埋前*脫水， 甲醛固定的時間越長，蛋白
質的提取回收效率越低。
2. 盡量取用從石蠟包埋組織塊中切取的薄片，或沒有封閉到載玻片上的沒有經
過蘇木精等染色的切片。
3. 材料越新鮮或甲醛固定時間越短，蛋白質的回收效率越高。
4. 提取試劑中含有含有刺激性的化合物，操作時要戴好乳膠手套，避免沾染皮
膚、眼睛和衣服，防止吸入口鼻，沾染皮膚 眼睛后，立即用清水或生理鹽
水沖洗，必要時尋求醫生的幫助。
5. 對于甲醛浸泡的組織樣本，每次可以取5-10 mg的組織樣本，用雙蒸水洗滌
離心收集后后，直接從步驟4開始操作。
6. 提取的蛋白沉淀如果用于ELISA、RIA等免疫實驗，可能需要先進行抗原修
復程序，但是如果用Western Blot或Dot blot實驗，一般情況下沒有必要。
7. 本試劑盒只能夠用于體外實驗，不能夠用于臨床、治療和動物體內實驗等，
由此產生的后果概不承擔責任
關聯產品 石蠟包埋組織DNAout（CAT#70502）
