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上海雅吉生物科技有限公司
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石蠟包埋組織中蛋白提取試劑盒
2021-10-21 閱讀(227)
描述：
福爾馬林固定石蠟包埋組織在生物醫學研究中被廣泛使用，但是從石蠟包埋組織中提取蛋白由于甲醛會介導
分子交聯而變得異常困難，傳統方法從石蠟包埋組織中提取蛋白需要使用有機溶劑重復脫蠟和水化，然后在
高溫下或不可避免的超聲處理后提取蛋白。這些方法雖然在某些情況下是比較有效的，但是操作繁瑣，需要
消耗 3-4 小時。Minute TM 石蠟包埋組織蛋白提取試劑盒提供了一種簡便，快速的方法，不需有機溶劑脫蠟。
整個過程可以在不到 1 小時的時間內完成，蛋白產量可以高達 2-3 毫克/毫升。
應用：
提取的蛋白可用于 SDS-PAGE，WB，ELISA，免疫沉淀和蛋白質組學研究。
試劑盒組分
1. 20ml 緩沖液 A
2. 20ml 緩沖液 B
3. 20 個 1.5ml 離心管
4. 2 根塑料研磨棒
儲存：
室溫儲存
所需附加材料
臺式離心機（最大轉速 14000-16000rpm）
加熱塊或者水浴
產品重要信息
本試劑盒可用于從石蠟包埋組織中提取總蛋白，最終提取蛋白產量和蛋白種類由固定時間
和樣品時間決定。長時間固定（>48 小時）和固定老化的樣品，預計提取的蛋白濃度會較低。
蛋白酶抑制劑推薦在 Buffer B 轉移到新的 1.5ml 離心管后添加（見步驟 3）。蛋白濃度測定，推
薦使用表面活性劑兼容的 BCA 試劑盒，因為提取緩沖液（Buffer B）中含有 1%的 SDS。研究
蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑（如羅氏）應在使用前加入 Buffer B 中。
操作方法：
1. 去除組織切片中多余的石蠟，組織切片厚度大約在 10-20um，大小應在 30-60 平方毫米。取
4-5 個組織切片放入 1.5 或 2.0ml 離心管中（實驗室自備），加入 1ml Buffer A。
2. 在 90-95℃加熱容塊或水浴中孵育 8-10 分鐘。翻轉管子 2-3 次后，迅速將熱的緩沖液*去
除，留下組織在管中。用吸頭將組織刮到一個新的 1.5ml 離心管中（試劑盒內提供的，注意
不要試用其他離心管，可能與提供的研磨棒不匹配）。
3. 翻轉 Buffer B 瓶子 20-30 次，使組織分離粉混勻，快速轉移 200ul Buffer B 到裝有組織的管
子中（可選：將吸頭剪掉 2-3mm 使開口變大更容易轉移 Buffer B）。Buffer B 加入的量根據
組織切片的數量決定，一般每個組織切片使用 50ul Buffer B。
4. 使用試劑盒提供的研磨棒扭轉研磨組織樣品大約 2 分鐘（研磨棒是可重復使用的，用蒸餾水
清洗，用紙巾擦干即可）。蓋上蓋子，90-95℃加熱塊中或水浴加熱 40 分鐘-1 小時。加熱后
在 14000-16000rpm 離心 10 分鐘。將上清液轉移到一個新的離心管中即可用于下游應用或存
儲于-80℃。
