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上海雅吉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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| 參考價 | ￥ 3280 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號
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- 所在地 上海市
更新時間：2019-05-31 13:16:48瀏覽次數(shù)：238
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組織來源：乳腺組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介：
人肺動脈平滑肌原代細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
M199、FBS、上皮細胞生長添加劑、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：CM-H017）作為體外培養(yǎng)人乳腺上皮細胞的培養(yǎng)基。
人肺動脈平滑肌原代細胞因其培養(yǎng)難度高且傳代次數(shù)有限，細胞消化的步驟需要格外細心與謹慎。生物根據(jù)其豐富的原代細胞培養(yǎng)經(jīng)驗，總結(jié)出一套細胞消化的方法，有效降低了消化步驟對細胞的操作?，F(xiàn)分享給大家：
1. 當細胞達到80-90%融合時需要傳代培養(yǎng)。
2. 提前準備好多聚賴氨酸（PLL，貨號KL0403）或纖維粘連蛋白（BPF，貨號KL8248）包被好的培養(yǎng)瓶。
3. 將*培養(yǎng)基，胰酶/EDTA消化液（T/E，貨號KL0103），胰胰中和液（TNS，貨號KL0113）和不含鈣鎂離子的DPBS（貨號KL0303）加熱至室溫。我們不推薦用37度水浴加熱試劑和培養(yǎng)基。
4. 用DPBS沖洗細胞。
5. 以T-75培養(yǎng)瓶為例，向培養(yǎng)瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。輕輕搖動培養(yǎng)瓶保證細胞被胰酶/EDTA消化液*覆蓋。將培養(yǎng)瓶置于37度培養(yǎng)箱1-2分鐘直到細胞變圓。在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化。
6. 在消化期間，準備一支50ml離心管加入5ml胎牛血清（FBS，貨號KL0500）。
7. 將胰酶/EDTA消化液從培養(yǎng)瓶中吸出至50ml離心管中（一小部分細胞已消化下來），將培養(yǎng)瓶繼續(xù)置于37度培養(yǎng)箱中1-2分鐘（此時培養(yǎng)瓶中沒有液體）。
8. 在孵化結(jié)束時，輕輕拍打培養(yǎng)瓶側(cè)面使細胞脫離表面。在顯微鏡下檢查以確保所有細胞已脫離。
9. 向培養(yǎng)瓶中加入5ml胰酶中和液，將消化后的細胞轉(zhuǎn)移至50ml離心管中。再加入5ml胰酶中和液沖洗培養(yǎng)瓶，以保證所有細胞被收集。
10. 在顯微鏡下觀察剩余細胞數(shù)量以確定是否收集成功，細胞數(shù)量應小于5%。
11. 以1000轉(zhuǎn)/分離心收取的細胞懸液5分鐘，然后在培養(yǎng)基中重懸細胞。
12. 細胞計數(shù)，然后將細胞以推薦的細胞密度接種在包被好的培養(yǎng)瓶中。
