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上海雅吉生物科技有限公司
主營產品： 培養原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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- www.yajimall.com
| 參考價 | ￥ 226 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號
- 品牌
- 廠商性質 生產商
- 所在地 上海市
更新時間：2019-07-24 14:09:43瀏覽次數：788
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產品簡介：
1. 我們生產的SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一種比較強烈的細胞組織裂解液。SDS裂解得
到的蛋白樣品可以用于常規的Western、ChIP(染色質免疫共沉淀，chromatin
immunoprecipitation)等。
2. SDS的主要成分為SDS，sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium
orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白降解。
3. 用裂解得到的蛋白樣品，可以用我們生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由
于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
使用方法:
對于培養細胞樣品：
1. 取適當量的 SDS混勻，在使用前數分鐘內加入 PMSF（貨號 WB0114），使 PMSF 的終
濃度為 1mM。
2. 對于貼壁細胞，去除培養液用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍，加入適量裂解液，用槍吹打
數下，使裂解液和細胞充分接觸，輕輕的搖晃約 5-10 分鐘，充分裂解后，10000-14000g 離心 10 分鐘，
取上清，即可進行后續操作。
裂解液用量說明： 用于不同規格標準培養板裂解液容量
板規格/表面積 試劑容量
100mm 500-1000μι
60mm 250-500μι
6-well plate 200-400μιper well
24-well plate 100-200μιper well
96-well plate 50-100μιper well
3. 對于懸浮細胞，離心收集細胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍，加入適量裂解液，用槍
吹打把細胞吹散，用手指輕彈或旋渦震蕩 5-10 分鐘以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞
沉淀。如果細胞量較多，必需分裝然后再裂解，充分裂解后，10000-14000g 離心 10 分鐘，取上清，
即可進行后續操作。
對于組織樣品：
1.手術切除的組織塊迅速置于預冷的生理鹽水中，漂洗數次，以清潔表面的血跡，將組織稱量后切成
幾個較小的組織塊放入組織勻漿器中。
2. 取適當量的 SDS 裂解液混勻，在使用前數分鐘內加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按組織凈重（g）：裂解液(ml)=1：10 的比例，加入相應體積的裂解液進行勻漿(如果裂解不充分可
以適當添加更多的裂解液 如果需要高濃度的蛋白樣品 可以適當減少裂解液的用量) 。
4. 用勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3- 5 分鐘，取上清，即可進行后續作。
注：SDS 裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因
組 DNA 等的復合物。在不檢測和基因組 DNA 結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清
用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠
狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時，
通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。
SDS裂解液注意事項：
1. 抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進行，建議將樣品分裝成合適的量，然后冷凍干燥或直接
以液體狀態置-80℃中保存，不要反復凍融。
2. 需自備 PMSF， 建議在臨用前數分鐘內加入 PMSF。
