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上海雅吉生物科技有限公司
主營產品： 培養原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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| 參考價 | ￥ 226 |
| 訂貨量 | 1 |
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更新時間：2019-07-24 14:13:48瀏覽次數：397
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1. Western及IP細胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本細胞裂解液裂解的細胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
2. Western及IP細胞裂解液的主要成分為EDTA 以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，Na3VO4，leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
3. 用Western及IP細胞裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用我們生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
Western及IP細胞裂解液使用方法:
對于培養細胞樣品：
1. 取適當量的Western及IP細胞裂解液混勻，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
2. 對于貼壁細胞，去除培養液用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。輕輕的搖晃約5-10分鐘。充分裂解后，10000-14000g離心10分鐘，取上清，即可進行后續操作。
裂解液用量說明： 用于不同規格標準培養板裂解液容量
板規格/表面積
試劑容量
100mm
500-1000μι
60mm
250-500μι
6-well plate
200-400μιper well
24-well plate
100-200μιper well
96-well plate
50-100μιper well
3. 對于懸浮細胞，離心收集細胞，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍.加入適量裂解液用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈或旋渦震蕩5-10分鐘以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g離心10分鐘，取上清，即可進行后續操作。
Western及IP細胞裂解液對于組織樣品：
1.手術切除的組織塊迅速置于預冷的生理鹽水中，漂洗數次，以清潔表面的血跡，將組織稱量后切成幾個較小的組織塊放入組織勻漿器中。
2. 取適當量的Western及IP細胞裂解液混勻，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
3. 按組織凈重（g）：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相應體積的裂解液進行勻漿(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液 如果需要高濃度的蛋白樣品 可以適當減少裂解液的用量) 。
4. 用玻璃勻漿器勻漿直至充分裂解。
5. 充分裂解后10000-14000g離心3- 5分鐘取上清即可進行后續作。
注意事項：
1. 抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。建議將樣品分裝成合適的量，然后冷凍干燥或直接以液體狀態置-20℃中保存，不要反復凍融。
2. 需自備PMSF。建議在臨用前數分鐘內加入PMSF使PMSF的終濃度為1mM。PMSF(WB0114)可以向我公司訂購。
3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
