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產品簡介：
1. 細菌總蛋白抽提試劑盒(Tissue Mitochondria Isolation Kit)是用于快速分離培養細胞線
粒體的試劑盒。
2. 本試劑盒在分離線粒體的同時可以獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，可用于研究細胞色素c等
線粒體蛋白向胞漿的釋放。
3. 使用本試劑盒分離獲得的線粒體純度較高，并且絕大部分分離獲得的線粒體都含有完整的內
膜和外膜，并具有線粒體的生理功能。因此本試劑盒分離得到的線粒體可以用于線粒體的生
理功能等方面的研究。
4. 本試劑盒分離得到的線粒體也可以被試劑盒中的線粒體裂解液或其它適當裂解液裂解后用
于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。
細菌總蛋白抽提試劑盒使用方法:
1. 準備溶液：室溫融解試劑盒中的各種溶液，溶解后立即置于冰上并混勻。如果終目的是制
備線粒體蛋白，根據樣品數量，取適量相應的線粒體分離試劑備用，在線粒體分離試劑加入
到細胞樣品中前數分鐘內加入1:100稀釋的酶抑制劑。取適量線粒體裂解液備用，在線粒體裂
解液加入到線粒體樣品中前數分鐘內加入1:100稀釋的酶抑制劑。
2. 從組織中分離線粒體：
3. 使用新鮮的動物組織，通常要求動物處死后不超過一小時，并且保存在冰上的組織。請勿使
用經過冷凍保存的組織。
4. 剪取一小塊組織，重量約為50-100mg。在1.5ml離心管內對剪取的組織進行稱重。用PBS洗滌
組織一次。
5. 把組織放在一個置于冰上的離心管或培養皿中，用剪刀或刀片把組織剪切成非常細小的組織
碎片。
6. 加入10體積預冷的線粒體分離試劑A或臨用前添加了1:100稀釋的酶抑制劑的線粒體分離試劑
A，在冰浴上進行勻漿，勻漿10次左右。
注：如果組織的重量為50mg，可以大致認為組織的體積接近50微升，此時需加入500微升線
粒體分離試劑A。
7. 把勻漿在600g，4℃離心5分鐘。
注：如需獲得純度更高的線粒體，可以將此步驟的離心速度改為1000g，其它離心條件不變；
獲得更高純度線粒體的缺點是相同數量細胞的線粒體抽提得率會下降。
8. 小心把上清轉移到另一離心管中，在11000g，4℃離心10分鐘。
注：如需獲得純度更高的線粒體，可以將此步驟的離心速度改為3500g，其它離心條件不變；
獲得更高純度線粒體的缺點是相同數量細胞的線粒體抽提得率會下降。
9. 小心去除上清。沉淀即為分離得到的線粒體。
注：如果希望獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，在本步驟需收集上清，并且在收集上清時注意
勿觸及沉淀。隨后把收集的上清12000g，4℃離心10分鐘。取上清即為去除線粒體的細胞漿
蛋白。
10. 如果用于線粒體的蛋白分析，初始重量為50-100mg的組織樣品分離得到的線粒體樣品中可以
加入150-200微升臨用前添加了1:100稀釋的酶抑制劑的線粒體裂解液裂解線粒體。裂解后的
線粒體可以用于PAGE、Western、IP以及線粒體中的一些酶活性的測定等。裂解后的蛋白樣
品可以使用BCA法測定蛋白濃度。
11. 如果用于雙向電泳，請使用適當的用于雙向電泳的裂解液處理線粒體。
注意事項：
1. 使用說明中的操作步驟按照組織重量為50-100mg進行說明，如果組織塊較大，可以按比例加大各
溶液的使用量。
2. 分離線粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進行，所用溶液需冰浴或4℃預冷。
3. 通常在分離線粒體時前后兩次離心速度選取600g和11000g，如果希望純度更高，但對線粒體的得
率要求不高，前后兩次離心速度可以采用1000g和3500g。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。