日韩欧美一区二区三区免费观看_精品国产欧美一区二区_波多野结衣乱码中文字幕_最新无码国产在线视频2021

PMSF(100mM)產(chǎn)品說(shuō)明

1. PMSF 英文名字：Phenylmethylsulfonyl fluoride，中文名稱：；苯
。分子式為C7H7FO2S，分子量為174.19。
2. 常用生化試劑，級(jí)別：high purity grade（高純級(jí)），純度>99%，用于不逆
地抑制絲氨酸類蛋白酶，比如：胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，血管舒緩素，枯
草蛋白酶，凝血酶。同時(shí)也可抑制半胱氨酸蛋白酶——木瓜蛋白酶，進(jìn)口試
劑配制。
3. 使用時(shí)把一管PMSF晶體全部倒入到PMSF溶劑中，溶解混勻，即配制成10毫升
100mM PMSF。
1. 新鮮組織經(jīng)過(guò)消化處理，通過(guò)適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，收集小鼠脾細(xì)胞制備單細(xì)胞懸浮液。
2. 4°C 400-500xg 離心棄上清取沉淀。
3. 加入 3-5 倍細(xì)胞體積的，輕輕吹打混勻，在冰上裂解 4-5 分鐘，并且裂解過(guò)程
中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。例如細(xì)胞沉淀的體積為 1ml，則加入 3-5ml 的紅細(xì)胞
裂解液。本步驟在室溫或 4 度操作均可。
4. 4°C 400-500xg 離心 5 分鐘，棄紅色上清。
5. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 3 和步驟 4 一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)
影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
6. 加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，重懸沉淀洗滌 1-2 次，4°C 400-500xg 離心
2-3 分鐘，棄上清。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的 5 倍。
7. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)密度，進(jìn)行下一步染色。
對(duì)于血液樣品：
1. 取新鮮抗凝血，4°C 400-500xg 離心 5 分鐘，離心棄上清。
2. 加入 6-10 倍細(xì)胞體積的，輕輕吹打混勻，在冰上裂解 4-5 分鐘，并且裂解過(guò)程
中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。例如細(xì)胞沉淀的體積為 1ml，則加入 6-10ml 的紅細(xì)胞
裂解液。
3. 4°C 400-500xg 離心 5 分鐘，棄紅色上清。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)
影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
5. 加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，重懸沉淀洗滌 1-2 次，4°C 400-500xg 離心
2-3 分鐘，棄上清。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的 5 倍。
6. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)密度，進(jìn)行下一步染色。
注意：對(duì)于微量或少量的血液樣品，可以在*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作，直接在第二步中加
入 10 倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液，并在室溫或 4℃裂解 4-5 分鐘。對(duì)于鼠的血液，裂解 4-5
分鐘已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至 10 分鐘，但通常不宜超過(guò) 15 分鐘，并
且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。后續(xù)步驟相同。