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南京億迅生物科技有限公司

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土壤堿性蛋白酶檢測試劑盒
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  • 所在地 南京市

更新時間:2019-11-07 11:32:27瀏覽次數:553

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【簡單介紹】
級別 其他
測定意義:
土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷化合物礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉化及其生物有效性,是評價土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響。通常按照其適pH范圍,分為堿性、中性和酸性三種類型磷酸酶。
土壤堿性蛋白酶檢測試劑盒

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測定原理:

堿性環境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過測定酚的生成量即可計算出S-AKP/ALP活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機、37℃恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸餾水、無水乙醇和甲苯。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4避光保存。

試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。用前加50mL蒸餾水充分溶解。

試劑三:液體×1瓶,4℃保存。

試劑四:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加1152μL無水乙醇(自備),48 μL蒸餾水充分溶解。變褐色后不能再使用)

標準品:液體×1瓶,2 μmol/mL苯酚標準液,4℃保存。

催化反應:

稱取風干混勻土壤約0.1g,加入0.05mL甲苯(自備),輕搖15min;加0.4 mL試劑一并且搖勻后,置于37℃恒溫培養箱,開始計時,催化反應24h;到時后迅速加入1mL試劑二充分混勻,以終止酶催化的反應。10000rpm室溫離心10min,取上清液置于冰上待測。

顯色反應:

1. 分光光度計預熱30 min以上,調節波長到660 nm,蒸餾水調零。

2. 空白管:取1mL玻璃比色皿,加入50 μL蒸餾水,100 μL試劑三,20 μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水830 μL,混勻后室溫靜置30 min,于660 nm測定吸光度,記為A空白管。

3. 標準管:1mL玻璃比色皿,加入50 μL標準液,100 μL試劑三,20 μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水830 μL,混勻后室溫靜置30 min,于660 nm測定吸光度,記為A標準管。

4. 測定管:1mL玻璃比色皿,加入50 μL上清液100 μL試劑三,20 μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水830 μL,混勻后室溫靜置30 min,于660 nm測定吸光度,記為A測定管。

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