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南京億迅生物科技有限公司

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BBT緩沖液(pH8.6)
BBT緩沖液(pH8.6)
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更新時(shí)間:2022-02-09 13:37:49瀏覽次數(shù):2732

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【簡(jiǎn)單介紹】
BBT緩沖液(pH8.6)專門應(yīng)用于電泳相關(guān)實(shí)驗(yàn),例如瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn),醋酸纖維素膜電泳實(shí)驗(yàn),檢測(cè)血清蛋白等電點(diǎn)等等相關(guān)實(shí)驗(yàn)

BBT緩沖液(pH8.6)

使用舉例:用于白蛋白(或丙種球蛋白)純度測(cè)定

(醋酸纖維素薄膜電泳法)

1試劑

1.1 BBT緩沖液(Ph8.6)

1.20.5%氨基黑染色液

取氨基黑10B0.5g,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及蒸餾水40ml的混合液中。

1.3漂洗液

取乙醇45ml,冰醋酸5ml及蒸餾水50ml,混勻。

1.40.2mol /L氫氧化鈉

取8g氫氧化鈉,加蒸餾水溶解成1000ml。

1.5透明液

取冰醋酸25ml,加無(wú)水乙醇75ml,混勻。

2 操作

2.1電泳

將膜條(2×8cm)粗糙面向下,浸入BBT緩沖液中,待*浸透,取出用濾紙吸去多余的緩沖液,將膜條粗糙面向上,加于電泳支架上的濾紙橋上(或橋下),于膜上距負(fù)極一端2cm處,直線狀滴加蛋白質(zhì)含量約5%的樣品2~3μl,通電,電流控制在0.4~0.6mA/cm[總電流量=生產(chǎn)要膜的寬度(cm)×膜條數(shù)],同時(shí)取新鮮人血清作對(duì)照,電泳時(shí)間以白蛋白與丙種球蛋白之間的電泳展開(kāi)距離達(dá)3~4cm為宜。

2.2 染色

電泳完畢,將膜條取下浸于染色液中,2~3分鐘后,用漂洗液反復(fù)漂洗至底色*脫凈。

2.3 透明

將漂凈并*干后的膜條浸于透明液至全部浸透為止,取出平鋪于潔凈的玻璃板上,干后即成透明薄膜,可供掃描法測(cè)定樣品純度和作為標(biāo)本長(zhǎng)期保存用。

2.4 純度測(cè)定

2.4.1 洗脫法:將漂洗凈的膜條用濾紙吸干,與正常人血清的電泳圖譜作對(duì)照,剪下白(或丙種球蛋白)帶A及其他雜蛋白質(zhì)區(qū)帶B,分別浸于5ml0.2mol/L氫氧化鈉溶液中,振搖數(shù)次,至色澤*浸出后,于620nm波長(zhǎng)下測(cè)其OD值,以相同條件下,無(wú)蛋白質(zhì)部分的膜條(其長(zhǎng)度分別同A及B)作空白對(duì)照。

樣品中白蛋白(或丙種球蛋白)含量%=A的OD值-A空白的OD值/(A的OD值-A空白的OD值)+(B的OD值-B空白的OD值)×100%

2.4.2 掃描法:將干燥的樣品醋酸纖維素薄膜電泳圖譜放入自動(dòng)光密度掃描儀,通過(guò)反射(未透明薄膜)或透射(已透明薄膜)方式測(cè)定各蛋白質(zhì)電泳區(qū)帶的OD值,根據(jù)儀器性能,可自動(dòng)或手工方法計(jì)算出樣品白蛋白(或丙種球蛋白)的百分含量。

附注

用掃描法測(cè)定白蛋白(或丙種球蛋白)純度時(shí),可采用麗春紅染色法,其染色液及漂洗液配方如下:

0.2%紅染色液:

取麗春紅0.2g,磺基水楊酸3g及三氯醋酸3g,用蒸餾水溶解并稀釋至100ml。

漂洗液:

取冰醋酸3ml,用蒸餾水稀釋至100ml。

BBT緩沖液(pH8.6)



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