RPA（恒溫擴增）技術(shù)應用于腫瘤基因檢測

腫瘤基因相關(guān)基因檢測在癌癥早期診斷中意義重大。目前的檢測金標準為PCR和基因測序技術(shù)，而這些技術(shù)大多需要精密的儀器和復雜的試驗流程，專業(yè)的實驗人員配置。在現(xiàn)有的分子診斷技術(shù)中，以RPA為代表的核酸等溫擴增技術(shù)以其快速，靈敏，無需儀器等特點，使突破以上壁壘成為可能。

近日，大連醫(yī)科大學劉元斌課題組發(fā)明一種無需任何儀器，實現(xiàn)快速檢測突變基因并肉眼識別的新方法，被稱為AS-RPA-PNA-SYBR (ARPS) system。該方法以RPA（重組酶聚合酶恒溫擴增技術(shù)）為基礎(chǔ)，加之PNA技術(shù)（肽核酸類似物），并利用SYBR Green I核酸染料法顯色，肉眼即可判斷核酸擴增與否。

文章中，作者比較了在PCR，測序以及ARSP在非小細胞肺癌中EGFR突變檢測應用，發(fā)現(xiàn)在非小細胞肺癌細胞系中，5分鐘便能檢測到EGFR 19Del(2)缺失突變，10分鐘檢測EGFRL SNP 突變，實現(xiàn)肉眼快速判斷（圖1），并在組織樣本中同樣得到驗證（圖2）。

同樣，10到20分鐘之內(nèi)成功檢測到EGFR點突變。與傳統(tǒng)的DNA測序方法相比較，ARPS有著許多優(yōu)勢之處，包括時間短，成本低，操作簡單，無需精密儀器等，而且，在基因組DNA樣本中，ARPS可以檢測到30%和40%的靶向突變位點，靈敏度與測序相當（圖3）。之前有文章報道稱，RPA技術(shù)與末端熒光檢測和膠體金側(cè)流試紙條以及微流控芯片結(jié)合檢測EGFR突變，但還沒有類似ARSP肉眼觀測法的應用。

然而，ARSP法同樣有待于進一步優(yōu)化。比如，對于每一次EGFR檢測來說，檢測靈敏性和特異性都還有待提高；由于樣本量有限，現(xiàn)仍需更多的臨床樣本實驗進行驗證。無論如何，在jing準醫(yī)療大背景下，對于一些沒有條件購買測序儀，以及不具備專業(yè)操作能力的不發(fā)達地區(qū)和國家，這種快速簡便，操作簡單的，無需任何儀器的ARSP基因檢測法無疑為癌癥基因檢測提供有效參考，同時也為分子即時診斷領(lǐng)域（POCT）提供新的潛在解決方案。

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運用安普未來開發(fā)的核酸恒溫擴增試劑盒RNA恒溫快速擴增試劑盒（熒光型）并利用SYBR Green I核酸染料法顯色，肉眼就可以看出有無擴增。