氟胺本質上是不發熒光的，但會與脂族伯胺（包括肽和蛋白質中的胺）迅速反應，生成藍綠色熒光衍生物。Amplite™熒光胺蛋白測定試劑盒提供了一種簡單的定量溶液中蛋白質濃度的方法。該Amplite™熒光胺蛋白測定試劑盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，無需任何分離步驟即可輕松實現自動化。該測定可以在30分鐘內完成。使用Amplite™熒光胺蛋白測定試劑盒，可以檢測到低至3 ug / mL的BSA。

1. 準備BSA標準品或測試樣品（75 µL） 
2. 加入熒光胺工作溶液（25 µL）
3. 在室溫下孵育5-30分鐘
4. 在Ex / Em = 380/470 nm時讀取熒光強度

重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。

配制標準溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

通過以1：2的系列稀釋度將適量的BSA標準品1 mg / mL（組分C）稀釋到PBS中以獲得BSA標準品（BS7-BS1）的系列稀釋液。

準備工作溶液

將全部內容的DMSO（組分B）添加到瓶中的熒光胺（組分A）中，并充分混合。注意： 2.5 mL的熒光胺工作溶液足以裝滿1個板。

程序

表1. 黑色96孔微孔板中BSA標準品和測試樣品的布局。BS = BSA標準品（BS1-BS7，1.563至100 µg / mL），BL =空白對照，TS =測試樣品。

表2. 每個孔的試劑組成。

1. 根據表1和表2提供的布局，準備BSA標準品（BS），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用30 µL試劑，而不是75 µL。
    
2. 在BSA標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中添加25 µL熒光胺工作溶液，以使總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，請向每個孔中添加10 µL熒光胺工作溶液，總體積為40 µL /孔。
    
3. 在避光條件下，于室溫下孵育反應5至30分鐘。
    
4. 使用熒光板讀數器在Ex / Em = 380/470 nm處監控熒光的增加。

數據分析

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從空白標準孔獲得的讀數（RFU）用作陰性對照。從其他標準的讀數中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標準讀數，以獲得標準曲線和方程式。該公式可用于計算BSA樣本。我們建議您使用在線線性回歸計算器，