使用方法

1. 膠原酶儲存液的配制

向每管100mg的膠原酶中加入100µL的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS（Hank’spinghengyanrongye，含Ca²⁺、Mg²⁺），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成1g/ml（即1000×）的儲存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。

使用前于冰上解凍，避免反復(fù)凍融。其用于組織和細胞分散的常用濃度為：0.5-2.5mg/ml，用于軟骨消化的常用濃度為1-2mg/ml，需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應(yīng)的文獻資料確定所需的*工作濃度。

2．組織的分離

1）使用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3-4mm大小的組織塊；

2）利用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗滌組織塊數(shù)次；

3）加入足量的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；

4）于37℃孵育4-18h。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl₂補充消化可以提高消化效率。

5） 已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育；

6）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次；

7）細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞，利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度。

8）于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞。

3． 器官灌注

1）向37℃預(yù)熱的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入膠原酶，另添加3mM的CaCl₂有助于提高分離效率；

2）按照已優(yōu)化的速率對相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液；

3）將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細胞或小片段組織塊與較大團塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進一步孵育；

4）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次；

5）細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞，利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度。

6）于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞。

產(chǎn)品性質(zhì)

中文別名：梭菌蛋白酶A，梭菌肽酶A

英文別名（English   synonym）：clostridiopeptidase A

CAS號（CAS NO.）：9001-12-1

分子量（Molecular   weight）：68-130 kDa

酶活力單位定義:在37℃，pH7.5 的條件下，5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1µM L-liangansuan的酶量定義為1個酶活力單位。

相關(guān)產(chǎn)品：

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運輸與保存方法

-20℃長期保存，避光防潮密閉干燥。