MycoLight™快速熒光細(xì)菌革蘭氏染色試劑盒為測定活細(xì)菌中的革蘭氏征兆提供了一種簡便的方法。革蘭氏染色是臨床和研究環(huán)境中常用的將細(xì)菌種類分類為兩個(gè)大類的方法。不幸的是，傳統(tǒng)的革蘭氏染色法是乏味的并且涉及細(xì)菌固定，如果要進(jìn)一步表征細(xì)菌，則這可能是一個(gè)顯著的缺點(diǎn)。MycoLight™快速熒光細(xì)菌革蘭氏染色試劑盒為活細(xì)菌提供了一步法革蘭氏染色測定法，克服了傳統(tǒng)革蘭氏染色測定法固有的問題。MycoLight™快速熒光細(xì)菌革蘭氏染色試劑盒利用兩種DNA染料MycoLight™Green和MycoLight™Red具有區(qū)分革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌的能力。MycoLight™Green對革蘭氏陽性細(xì)菌和陰性細(xì)菌均染色，而MycoLight™Red則優(yōu)先標(biāo)記革蘭氏陽性細(xì)菌。這兩種染料的激發(fā)/發(fā)射zui大值對于MycoLight™綠色約為484/504 nm，對于MycoLight™紅色約為518/600 nm。因此，當(dāng)革蘭氏陽性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌的混合物被染料染色時(shí)，革蘭氏陽性細(xì)菌將發(fā)出紅色熒光，而革蘭氏陰性細(xì)菌將發(fā)出綠色熒光。革蘭氏陽性和陰性染色可以分別用TRITC和FITC過濾器熒光監(jiān)測。當(dāng)革蘭氏陽性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌的混合物被染料染色時(shí)，革蘭氏陽性細(xì)菌將發(fā)出紅色熒光，而革蘭氏陰性細(xì)菌將發(fā)出綠色熒光。革蘭氏陽性和陰性染色可以分別用TRITC和FITC過濾器熒光監(jiān)測。當(dāng)革蘭氏陽性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌的混合物被染料染色時(shí)，革蘭氏陽性細(xì)菌將發(fā)出紅色熒光，而革蘭氏陰性細(xì)菌將發(fā)出綠色熒光。革蘭氏陽性和陰性染色可以分別用TRITC和FITC過濾器熒光監(jiān)測。

平臺

組件

協(xié)議范例

乍看上去

協(xié)議摘要

1. 準(zhǔn)備細(xì)菌樣本
2. 準(zhǔn)備并將MycoLight™染料工作溶液添加到細(xì)菌樣品中
3. 在室溫下與MycoLight™染料工作溶液在黑暗中孵育15分鐘
4. 使用FITC和TRITC濾光片組通過熒光顯微鏡或熒光光譜分析樣品

重要說明
使用前，請?jiān)谑覝叵陆鈨鏊刑准M件。

準(zhǔn)備工作溶液

MycoLight™染料工作溶液：
在試管中混合等體積的MycoLight™綠色（組分A）和MycoLight™紅色（組分B），并充分混合。

程序

細(xì)菌樣品的制備

1. 準(zhǔn)備濃度約為10 ^7個(gè)細(xì)胞/ ml的細(xì)菌樣品。在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中使細(xì)菌生長到對數(shù)后期。 注意：在波長= 600 nm（OD600）處測量細(xì)菌培養(yǎng)物的光密度，以確定細(xì)胞數(shù)。對于大腸桿菌培養(yǎng)，OD600 = 1.0等于8 x 10 ⁸細(xì)胞/ ml。
    
2. 通過以10,000 xg離心10分鐘除去培養(yǎng)基，然后將沉淀重懸于ddH ₂ O中，將細(xì)菌濃度調(diào)節(jié)至?10 ⁷細(xì)胞/ ml。

染色方案

1. 向100 µL細(xì)菌懸液中加入2 µL MycoLight™染料工作溶液。
    
2. 充分混合并在室溫下于黑暗中孵育15分鐘。
    
3. 用熒光顯微鏡通過FITC（Ex / Em = 488/530 nm）通道監(jiān)測革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)菌熒光，并通過TRITC（Ex / Em = 540/620 nm）通道監(jiān)測革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)菌熒光。 注意：該協(xié)議僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)不同的細(xì)菌菌株或其他特定需求進(jìn)行優(yōu)化。 注意：該試劑盒中的革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的相對比例也可以通過熒光光譜法估算。圖中包含樣本分析。

光譜

打開：高級頻譜查看器

2003004005006007008009000102030405060708090100Wavelength (nm)Normalized Intensity (%)

光標(biāo)位置

圖片

圖1.用MycoLight™快速熒光細(xì)菌革蘭氏染色試劑盒對大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的混合物進(jìn)行染色。紅色和橙色：革蘭氏陽性枯草芽孢桿菌細(xì)胞；綠色：革蘭氏陰性大腸桿菌細(xì)胞。 22413 MycoLight™快速熒光細(xì)菌革蘭染色試劑盒 MycoLight™ Rapid Fluorescence Bacterial Gram Stain Kit 100 Tests 22415 MycoLight™快速熒光革蘭氏陽性細(xì)菌染色試劑盒 MycoLight™ Rapid Fluorescence Gram-Positive Bacteria Staining Kit 100 Tests 22420 MycoLight™快速比色微生物活力檢測試劑盒 MycoLight™ Rapid Colorimetric Microbial Viability Assay Kit   22500 Cell Explorer™固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 *藍(lán)色熒光，在405nm激發(fā)* Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Blue Fluorescence with 405 nm Excitation* 200 Tests 22501 Cell Explorer™固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 *綠色熒光，在405nm激發(fā)* Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Green Fluorescence with 405 nm Excitation* 200 Tests

圖2.  制備了各種比例的  大腸桿菌  和  芽孢桿菌。1 mL細(xì)菌懸液用4μL染料工作溶液染色。用Cary Eclipse熒光分光光度計(jì)（A）測量熒光發(fā)射光譜（激發(fā)470 nm，發(fā)射480-700 nm），獲得綠色（490-510 nm）和紅色（590-610）的積分強(qiáng)度，綠色計(jì)算每種細(xì)菌懸浮液的λ/紅色比。 繪制了革蘭