PEB是一種萃取緩沖液,用于破壞和溶解植物組織和藻類細胞的總蛋白。與其他細胞破壞方法相比,使用陰離子洗滌劑LDS和推薦的程序(超聲和凍融循環(huán)的結(jié)合)可以增加可溶性和非降解蛋白的數(shù)量(見參考文獻)。對于1-2個樣品,估計操作時間為20-30分鐘。預(yù)計產(chǎn)量為1.5-6µg/µl總蛋白(從標準程序中回收),取決于起始材料,例如其生物階段,使用的均質(zhì)方法(珠狀攪拌器vs.超聲波)。
緩沖液組分(4x):包含~ 40% v/v甘油[HOCH2CH(OH)CH2OH], Tris-HCl [NH2C(CH2OH)3·HCl] pH 8.5, LDS [CH3(CH2)11OSO3Li], EDTA [(HO2CCH2)2NCH2CH2N(CH2CO2H)2]
建議在準備可用的1x PSB時,從新鮮的培養(yǎng)液中加入蛋白酶抑制劑(不與該緩沖液一起供應(yīng))。
利用PEB對植物/藻類組織全蛋白提取物的定量制備進行了優(yōu)化。使用下面描述的程序提取將導(dǎo)致蛋白質(zhì)的zuida產(chǎn)量,并減少蛋白質(zhì)的降解和聚集。
提取物可以用洗滌劑(LDS)兼容的方法進行定量,并在隨后的SDS PAGE凝膠電泳、Western Blotting和免疫沉淀中顯示出了高重現(xiàn)性和定量結(jié)果。
PEB已經(jīng)在高等植物、苔蘚、地衣、藻類、硅藻、甲藻和藍藻等多種物種和組織上進行了測試。