。免疫原

克隆擬南芥ACO1 (AT4G35830, Q42560)，密碼子120 - 898 (c -末端)，與n -末端6xHis標簽融合，在大腸桿菌中過表達。所有重組蛋白均聚集在包涵體中，經離心純化，在6 M鹽酸胍中溶解。蛋白經100 mM Tris-HCl 8.5, 10% (v/v)甘油，2 mM二硫蘇糖醇稀釋后重新折疊，并在免疫前濃縮。

主機的兔子

單克隆多克隆

純度血清

格式凍干

數量100µl

復配時，加入100µl無菌水

-20°C保存凍干/重組;一旦重組，使公平，以避免重復凍融循環，請記住，在打開之前，旋轉管短暫，以避免任何損失，凍干材料粘附在瓶蓋或管的兩側

Western blot (WB)

推薦稀釋倍數為1:5 000 - 1:10 000 (WB)。在較高濃度下，抗體特異性結合，產生約60 kDa的非特異性信號，包括Rubisco亞基

預計|表觀MW 98 kDa，注意，ac1, ACO2和ac3不能通過標準SDS-PAGE在尺寸上區分

1) 5ng純化的6xHis-AtACO1 (Δ119, 87 kDa);2) 2 ng 6xHis-AtACO1;3)擬南芥葉片中總蛋白(15 μg)以2體積50 mM Tris-HCl pH 8.0、5% (v/v)甘油、1% (w/v)十二烷基硫酸鈉、10 mM NaEDTA、1 mM苯jiahuangxianfo提取;4)從擬南芥細胞培養中純化出15µg的線粒體，5)從擬南芥葉綠體中獲得15µg的蛋白質

SDS-PAGE分離蛋白，在Whatman proan ba83, 0.2 μm硝酸纖維素上進行印跡。印跡在含0.1% (v/v) Tween 20和5% (w/v)干脫脂牛奶的tris緩沖鹽水(TBS)中室溫封閉1小時，并與抗ataco1抗體稀釋為1:10萬的新鮮封閉溶液(每8 x 6 cm印跡10 mL)在室溫下孵育2小時。用封閉液沖洗3次，然后與馬蘿卜過氧化物酶偶聯抗兔IgG抗體(稀釋于封閉液中為1:5 000)孵育45分鐘。用阻垢液洗滌2次，TBS-Tween洗滌2次。該信號是用標準ECL試劑和柯達X-Omat LS薄膜研制的。