Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶是 Q5® 超保真 DNA 聚合酶的改造版本,是一種新型熱穩定 DNA 聚合酶,具有 3'至 5'核酸外切酶活性,并融合增強延伸性能的 Sso7d 結構域。Q5U 在niaomiding結合域中含有突變,能夠讀取和擴增含有niaomiding和次huangpiaoling的模板。
許多有校對功能的聚合酶來自古細菌家族 B型 DNA 聚合酶,在遇到 DNA 模板中的niaomiding堿基時停止復制(Wardle, J. et al. (2008) Nucleic Acids Res. 36 (3), 705-711)。Q5U 在niaomiding結合域含有突變,能夠讀取和擴增含有niaomiding和次huangpiaoling的模板。該特征可用于擴增重亞硫酸氫鹽轉化、脫氨基、或受損 DNA,用于防止 PCR 體系中攜帶污染(與 dUTP 和 UDG 一起使用),以及用于 USER 克隆方法。
Q5U 是一種熱啟動聚合酶,含有在室溫下抑制聚合酶活性的dute適配體,可在經典 PCR 條件下達到zuiji擴增。
Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶的常見應用 古細菌家族 B 型聚合酶可以摻入/耐受多種修飾的核苷酸,但在遇到niaomiding和次huangpiaoling時會停止擴增。Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶是一種經過改造的 Q5 超保真 DNA 聚合酶,可有效地整合 dUTP 并擴增含niaomiding的模板。由 Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶的常見應用如上圖所示。 圖 2:Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶實現重亞硫酸氫鹽轉化 DNA 的優異擴增
使用 Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶(Q5U)、Phusion U 熱啟動 DNA 聚合酶(P)和 KAPA Hifi HotStart Uracil + ReadyMix PCR 試劑盒(K)擴增重亞硫酸氫鹽轉化的人基因組 DNA 靶標。擴增子名稱和片段長度標注在電泳膠上方。每 25 μl 反應物含有 12 ng 重亞硫酸氫鹽轉化的 DNA(Qiagen)。所有反應均根據制造商的推薦使用 35 個循環進行,通過微流體芯片 LabChip 分析展現。 圖 3:Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶能夠高效擴增石蠟包埋正常肺樣品 DNA
石蠟包埋正常肺樣品 DNA(Biochain)。擴增片段長度標注在電泳膠上方,每個 25 μl 反應物含有 18 ng FFPE DNA(Biochain),循環條件與該樣品類型的推薦一致,通過微流體芯片 LabChip 分析展現。 圖 4:Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶能夠高效擴增酶促脫氨的 DNA 使用 Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶(Q5U)、Phusion U 熱啟動 DNA 聚合酶(P)和 KAPA Hifi HotStart Uracil + ReadyMix PCR 試劑盒(K)擴增酶促脫氨(APOBEC)的基因組 DNA 靶標。擴增子名稱和片段長度標注在電泳膠上方。 每個 50μl 反應物含有 12 ng 酶促脫氨基的 DNA。 所有反應均根據制造商的推薦使用 35 個循環進行,并通過微流體芯片 LabChip 分析展現。 圖 5: USER® 克隆流程
在 USER 克隆中,通過 PCR 擴增出 DNA 靶分子和克隆載體,兩個片段的同源序列設計為 8-12 個堿基。PCR 引物以 5'A 起始,并在同源區 3'端含有一個脫氧niaomiding(dU),可以設計為多片段組裝,核苷酸替換,插入和/或缺失。。建議每種引物終濃度為 0.5 μM 即可得到zuijia結果。 圖 6:Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶與 Taq 熱啟動 DNA 聚合酶相比,可更高效準確的用于USER克隆
使用 Q5U 熱啟動超保真 DNA 聚合酶和熱啟動 Taq DNA 聚合酶做 USER 克隆,將 3 kb lacZ 基因連接到 pET21a 載體骨架中。菌落總數(A)和藍色菌落的百分比(B)證明:有 Q5U 的反應展現了更高的組裝效率和更高的準確度。使用 Sanger 測序進一步驗證組裝準確性,結果顯示:普通 Taq 酶組裝的 4 個藍色克隆中有許多點突變,但使用 Q5U 的 4 個藍色克隆中沒有突變(C)。“X"表示用普通 Taq 酶產生的克隆中發現的點突變數量,與以前的研究結果同樣證明了 lacZ 的高突變耐受性。(Barnes, W. M. (1992) Gene, 112, 29-35.) 隨酶提供的試劑如下試劑隨該產品提供
儲存溫度(℃) | 濃度 | |
Q5U™ 反應緩沖液 | -20 |