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K. lactis 蛋白表達(dá)試劑盒 .
SacII.
K. lactis GG799 感受態(tài)細(xì)胞
酵母碳基礎(chǔ)培養(yǎng)基
K. lactis GG799 感受態(tài)細(xì)胞
酵母碳基礎(chǔ)培養(yǎng)基
特性
可克隆和表達(dá)對(duì)大腸桿菌有毒性的基因
可同時(shí)表達(dá)多個(gè)基因
無(wú)需昂貴的抗生素或甲醇
易操作的實(shí)驗(yàn)步驟，適用于無(wú)酵母表達(dá)經(jīng)驗(yàn)者
有吸引力的商業(yè)shouquan
有吸引力的商業(yè)shouquan
概述
K. lactis 蛋白表達(dá)試劑盒提供了一種在乳酸克魯維酵母（Kluyveromyces lactis）中表達(dá)目的基因的簡(jiǎn)便方法。目的基因克隆到 pKLAC 系列整合載體中，既可表達(dá)胞內(nèi)蛋白，亦可表達(dá)分泌型蛋白。與其它酵母和細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)相比，K. lactis 蛋白表達(dá)系統(tǒng)有著諸多優(yōu)點(diǎn)。首先，乳酸克魯維酵母具有高培養(yǎng)密度及整合多拷貝質(zhì)粒的能力，使其可成功制備大量的高表達(dá)蛋白質(zhì)；其次，pKLAC1 系列載體使用強(qiáng) LAC4 啟動(dòng)子，該啟動(dòng)子經(jīng)修飾，在大腸桿菌中無(wú)背景表達(dá)，因此，可用于對(duì)大腸桿菌有毒性的基因表達(dá)；再有，試劑盒提供高效轉(zhuǎn)化的 K. lactis 感受態(tài)細(xì)胞，使得該系統(tǒng)適用于需要大量轉(zhuǎn)化子的實(shí)驗(yàn)，比如利用 cDNA 文庫(kù)進(jìn)行表達(dá)克隆；另外，酵母轉(zhuǎn)化子的篩選不需要昂貴的抗生素，培養(yǎng)基中也不需要甲醇；最后，K. lactis 細(xì)胞表達(dá)的蛋白質(zhì)可以進(jìn)行翻譯后修飾，因而可成為細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)的有用替代。
pKLAC2 屬于通用表達(dá)載體。利用這些載體既可使重組蛋白在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，也能通過(guò)與
K. lactis α-factor 的融合實(shí)現(xiàn)分泌表達(dá)。pKLAC2 的多克隆位點(diǎn)與 NEB 其它表達(dá)系統(tǒng)相兼容。GG799 是 K. lactis 蛋白表達(dá)試劑盒中提供的基礎(chǔ)菌株。其特點(diǎn)是細(xì)胞生長(zhǎng)密度與異源蛋白表達(dá)效率jigaoGG799 細(xì)胞未經(jīng)遺傳修飾。
蛋白質(zhì)的分泌過(guò)程。在細(xì)胞核中，整合表達(dá)載體編碼了一個(gè)含有 ɑ-MF 結(jié)構(gòu)域（藍(lán)色）和目的蛋白（黑色）的融合蛋白。融合蛋白表達(dá)后，位于 ɑ-MF 上的信號(hào)肽就會(huì)指導(dǎo)融合蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER），信號(hào)肽即被信號(hào)肽酶（SP）切除。融合蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至高爾基體，Kex 蛋白酶在此將 α-MF 結(jié)構(gòu)域切除。隨后，目的蛋白質(zhì)被分泌到細(xì)胞外。
K. lactis 的蛋白表達(dá)。SDS-PAGE 電泳分離檢測(cè)分泌性表達(dá)的重組麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP），菌體生長(zhǎng)在富含蛋白胨（peptone）的培養(yǎng)基中，直接上樣檢測(cè)。考馬斯亮藍(lán)染色鑒定。泳道 1：蛋白分子量 Marker；泳道 2：野生型 K. lactis 細(xì)胞培養(yǎng)液（15 μl）；泳道 3：整合有大腸桿菌 malE 基因表達(dá)框的 K. lactis 細(xì)胞培養(yǎng)液（15 μl）。
K. lactis 蛋白表達(dá)試劑盒包括
- pKLAC2 載體和 pKLAC1-malE 對(duì)照質(zhì)粒
- SacII
- 整合測(cè)序引物套裝
- K. lactis GG799 感受態(tài)細(xì)胞和轉(zhuǎn)化試劑
- 酵母碳基礎(chǔ)培養(yǎng)基與乙酰胺溶液
- 酵母碳基礎(chǔ)培養(yǎng)基與乙酰胺溶液
