WAT11感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，可用于DNA的化學轉化，經(jīng)pGADT7質粒檢測轉化效率高達10cfu/ugDNA-80℃可保存三個月。

基因型為:MATaleu2-3112 trpl-1canl-100ura3-1ade2-1his3-1115

操作方法:

1.CarrierDNA在每次使用前要通過加熱處理使其變性為單鏈狀態(tài)，步驟如下:CarrierDNA放

95℃水浴或金屬浴3min快速插入冰中靜置3min再次放95℃水浴或金屬浴3min快速插入冰中靜置3min 以上。

備注:Carrier DNA 加入請?zhí)崆白冃蕴幚?95-100°℃5min快速冰浴重復一次于冰浴5min之內使用

2取100ul冰上融化的R5421 感受態(tài)細胞，依次加入預冷的目的質粒0.5-3ugCarrier DNA 10ul

PEG/LiAc500pl 并吸打幾次混勻30℃水浴 30min(15min時翻轉6-8次混勻)。

3.將管放42℃水浴15min(75min 時翻轉 6-8 次混勻)。

4.5000rpm 離心40s 棄上清，ddH?O 400pl 重懸，離心30s棄上清。

5.ddHO 50ul 重懸，涂板，29℃培養(yǎng) 48-96h。

注意事項:

1.感受態(tài)細胞zuihao在冰上融化

2.轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

3.同時轉化 2-3 種質粒時可增加質粒的用量。

4.WATII 酵母菌株對高溫敏感，zuishi生長溫度為27-30℃;高于31℃生長速度和轉化效率呈指數(shù)下降。

5.菌落變粉不是污染,是酵母細胞生長中一一個常見現(xiàn)象。當細胞在平板培養(yǎng)幾天后，平板的 Adenine

被酵母消耗完畢，酵母試圖通過自身代謝途徑合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破壞，Adenine合成途徑受阻;又由于其ADE45678基因均正常，所以造成中間產物 P-ribosvlamino imidazole(AIR)在細胞中積累而使菌落變?yōu)榉奂t色

6.酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂

板為例:涂 YPDA 平板 29℃.48增養(yǎng)可見直徑mm克隆:涂SD單快平板29948-60h 培養(yǎng)

可見直徑1mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆。