酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)制備試劑盒

Yeast Electro Competent Cell Transformation Kit

版本號:2021-05-28

Cat.NO.ZC137

試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性:

試劑盒組成20T(50μl/支)100T(50ul/支)

溶液A(制備液)50mL100mL

溶液B(凍存液)15 mL30mL

說明書1份1 份

儲存:產(chǎn)品4℃保存。

適用范圍:

適用于釀酒酵母，畢氏酵母，裂殖酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化。產(chǎn)品說明:

1.操作簡單,單溶液制備，除酵母培養(yǎng)的時(shí)間外，整個(gè)操作只需要30余分鐘

2.制備得到的感受態(tài)細(xì)胞可以-80℃保存6個(gè)月，方便多次使用，免去每次轉(zhuǎn)化都要新鮮制備感受態(tài)細(xì)胞(暫時(shí)未實(shí)現(xiàn)建議現(xiàn)制現(xiàn)用)

3zuigao轉(zhuǎn)化效率可達(dá)到0.2-1x10°個(gè)轉(zhuǎn)化子/ug質(zhì)粒DNA。

4.得到的感受態(tài)細(xì)胞可以用各種線性或環(huán)狀酵母穿梭質(zhì)粒 DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化，例如 YIpYRpYCpYEp和YAC 等。

5.可以用于酵母雙雜交、定點(diǎn)突變(Site-Directed Mutagenesis)、基因破壞(Gene Disruption)、等位突變基因修復(fù)(Mutant Allele Recovery)等實(shí)驗(yàn)。(一)酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備:

1.菌種活化。-80℃保存的菌種在固體YPDA培養(yǎng)基上四區(qū)劃線，在30℃培養(yǎng)2-4天，待酵母單菌落長至2mm 長時(shí)，接種。

注:4℃保存2周內(nèi)的酵母平板可以直接進(jìn)行挑菌復(fù)蘇保存時(shí)間越長酵母的活性越低;不要使用4

保存一個(gè)月以上的平板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.挑取2mm酵母單菌落接種到3mL液體YPDA培養(yǎng)基中30℃過夜培養(yǎng)。

3.第二天轉(zhuǎn)接到含有50mL液體YPDA培養(yǎng)基的三角瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，待OD600到1.0-1.5左右(相當(dāng)

于1x10細(xì)胞/mL)冰上放置15分鐘

注:(1),可用4℃保存一個(gè)月內(nèi)的的酵母菌培養(yǎng)產(chǎn)物3mL接種50mLYPDA培養(yǎng)基過夜培養(yǎng)后，離

心收集細(xì)胞，用于下游實(shí)驗(yàn)，此步可以節(jié)約菌種活化，小搖需的時(shí)間。

(2).不同菌種對應(yīng)的zuishiOD值有差異，不同的OD會影響最終電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率;如有

必要可以摸索zuishi條件。

4.收集細(xì)胞:4℃3000g，離心5min，去上清用50ml的冰冷的滅菌水重懸。建議重復(fù)洗滌一次;

5.用20mL冰冷的溶液A懸浮、洗滌沉淀:4℃3000g.離心5min，去上清。

6.沉淀中加入0.5mL冰冷的的溶液B懸浮，既獲得酵母感受態(tài)細(xì)胞，按50-100uL 分裝干1.5mL 無

菌凍存管(可直接用于轉(zhuǎn)化)。