6
產品簡介
2 × Tolo Fluorescent LAMP Premix 適用于以 DNA 模板的 LAMP (環介導等溫擴增) 反應。LAMP 是常見的等溫擴增技術，使用 LAMP 特異性引物和鏈置換聚合酶 Bst.快速擴增靶標核酸。該試劑盒是 2×預混液，包含 Bst.鏈置換聚合酶和優化的 LAMP 緩沖液。本產品中采用基因工程改造的 Tolo Bst. DNA polymerase，具有良好的耐熱性能，非常適宜 LAMP 擴增。本產品同時提供熒光染料，便于在靶標核酸擴增過程中進行實時熒光監測。
產品組分
組分 | 25102 (100 rxns) |
2 × Tolo Super LAMP Premix | 1.25 mL |
50 × LAMP Floorescent Dye | 50 μL |
保存條件
≤ -20℃儲存，≤ 0℃運輸；
實驗流程
1.制備10 × LAMP Primers Mix：
組分 | 體積 | 10 × 濃度（STOCK） | 1 × 濃度（STOCK） |
FIP Primers（100 μM） | 16 μL | 16 μM | 1.6 μM |
BIP Primers（100 μM） | 16 μL | 16 μM | 1.6 μM |
F3 Primers（100 μM） | 2 μL | 2 μM | 0.2 μM |
B3 Primers（100 μM） | 2 μL | 2 μM | 0.2 μM |
Loop F Primers（100 μM） | 4 μL | 4 μM | 0.4 μM |
Loop B Primers（100 μM） | 4 μL | 4 μM | 0.4 μM |
ddH2O | Up to 100 μL |
◆ 在 nuclease-free water 中制備的 10 ×LAMP Primers Mix 可在–20°C 儲存長達 2 年。
2.制備LAMP 反應體系：
組分 | 體積 |
2 × Tolo Super LAMP Premix | 12.5 μL |
10 × LAMP Primers（supplied by user） | 2.5 μL |
50 × LAMP Floorescent Dye | 0.5 μL |
Target DNA | x μL（不超過反應總體積的 1/10） |
ddH2O | Up to 25 μL |
◆ 室溫解凍所有組分后置于冰上，短暫渦旋并瞬離后使用。
◆ 吸取反應預混液到所需的反應容器中并添加待測樣品，短暫渦旋并瞬離后反應。
◆ 建議設置無模板的陰性對照反應體系，并用等體積的 nuclease-free water 補齊反應體系。
3.LAMP 反應程序
配制完成后，將上述反應體系置于 65℃孵育 30～60 min。對于拷貝數較低的待測靶標或復雜樣品類型的反應，可根據需要適當延長擴增時間。85℃加熱 5 min 便可滅活體系中的 Bst.酶。
注意事項
1. 可在冰上或室溫條件下，將 2 × Tolo Super LAMP Premix 解凍，充分混勻后使用；不推薦對預混液進行加熱溶解。
2. 建議反應完成后避免開蓋。如需瓊脂糖凝膠電泳或其他后續分析，應在分區空間或單獨設備中進行開蓋。
3. 本產品僅供科研使用。
