XL10-Gold是由Stratagene開發的特異性用于大質粒或珍貴連接產物轉化或構建文庫的超級感受態細胞。XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型,Hte是Stratagene開發的特異性提高感受態轉化效率及大質粒轉化能力的宿主菌基因型,已成功應用于40kd質粒的構建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統;同時缺失核酸內切酶(endA),提高了質粒DNA的產量和質量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA的穩定性;TetR,CamR賦予菌株四環素和lvmeisu抗性;lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍、白斑篩選。XL10-Gold電轉感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率可達1×1010cfu/μg DNA。
基因型為:TetR Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F' proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR]
1.電極間距為0.1cm 的電轉杯(Gene Pulser*/MicroPulser™ electroporation cuvettes)插入碎冰中,壓實冰面,冰中靜置5分鐘,使電轉杯充分降溫。(電轉杯重復使用方法:每次用完后,用大量的自來水沖洗干凈去掉菌液和 DNA,用蒸餾水洗3遍,將其泡在75%乙醇中30分鐘,取出杯子,瀝干液體,放在超凈臺中,使乙醇充分揮發,蓋上蓋子放干燥地方備用)。2.取-70℃保存的感受態細胞插入冰中,待細胞剛化凍后,加入質粒DNA或連接產物(洗脫或溶解質粒的溶液中離子不能太高,或用雙蒸水稀釋,對照pUC19可以用無菌水稀釋到10pg/μl),用手指boda管底輕輕混勻,立即插入冰中,在超凈臺中用無菌吸頭將細胞/DNA混合物快速轉移到電擊杯中,避免產
生氣泡,確保細胞沉到杯底,蓋上杯蓋,空管保留待用。3.啟動電轉儀,設置電擊參數:2.4kV,200Ω,25μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser)。用紙巾
擦掉電轉杯外部的水分,將電轉杯放入電轉槽中進行電擊。完成后,將電轉杯插入冰中,加入950μl無抗生素的 SOC 或 LB培養基,并將液體轉移到原來保留的感受態空管中,37℃,150-250rpm 振蕩培養1小時。