人緊密連接蛋白-4（claudin-4) ELISA試劑盒

規(guī)格：48/96

貨號：rf1002

1.  標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
3200ng/L  5 號標(biāo)準品  150µl 的原倍標(biāo)準品加入 150µl 標(biāo)準品稀釋液
1600ng/L  4 號標(biāo)準品  150µl 的 5 號標(biāo)準品加入 150µl 標(biāo)準品稀釋液
800ng/L  3 號標(biāo)準品  150µl 的 4 號標(biāo)準品加入 150µl 標(biāo)準品稀釋液
400ng/L  2 號標(biāo)準品  150µl 的 3 號標(biāo)準品加入 150µl 標(biāo)準品稀釋液
200ng/L  1 號標(biāo)準品  150µl 的 2 號標(biāo)準品加入 150µl 標(biāo)準品稀釋液
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7.  溫育：操作同 3。
8.  洗滌：操作同 5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進

陰陽對照

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