 |
伊萊博生物科技（上海）有限公司
主營產(chǎn)品： 動(dòng)物行為學(xué)檢測,大中小型動(dòng)物實(shí)驗(yàn),細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù) |
會(huì)員.png)
6
聯(lián)系電話
15221734409
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 張經(jīng)理
- 電話：
- 021-66010608
- 手機(jī)：
- 15221734409
- 傳真：
- 地址：
- 上海市寶山區(qū)長江南路180號(hào)B區(qū)B650
- 郵編：
- 200439
- 個(gè)性化：
- www.yilaibohb.com
- 網(wǎng)址：
- www.shyilaibo.com/
微信掃碼進(jìn)入微名片
成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
2024-3-19 閱讀(1418)
1. C57小鼠，8-10周，通過頸椎脫位處死，浸入75%乙醇浸泡5分鐘，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中。
2. 使用眼科剪和鑷子，使髖關(guān)節(jié)脫臼，保持股骨頭完整。
3. 用止血鉗去除每個(gè)股骨頭的軟骨帽，將組織放入含2%雙抗的PBS中。
4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍，將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中。
5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片，加入3ml預(yù)熱的Collagenase D（1.5mg/ml）。
6. 放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第一次消化，時(shí)間2h 。
7. 第一次消化結(jié)束后，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，40um的細(xì)胞篩過濾后，離心1500rpm，2min。
8. 沉淀用DMEM培養(yǎng)基重懸，計(jì)數(shù)，種植在24孔板中。
9. 在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D，放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第二次消化，時(shí)間2h，然后收集細(xì)胞。
