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江蘇肯爾菲實驗儀器貿易有限公司
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更新時間：2024-09-20 12:12:36瀏覽次數：204
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一滴血做流式，選擇guava微流式技術
超微量樣本檢測T淋巴細胞亞群變化
常規流式實驗至少需要100μl 樣品（1×106個細胞）完成一次檢測，無法滿足“一滴血做流式"的需要。
默克密理博的“guava微流式技術"成功突破此瓶頸，以10μl超微量上樣量（1×105個細胞）
完成常見流式細胞學實驗。不僅大大節省了細胞量、藥物、抗體，也有效地降低了實驗者工作負擔。
現在，以常規樣品量（100μl）至少可以完成10次實驗，從而開拓新實驗設計思路，加速科研成果的誕生！
“使用(Guava)流式細胞儀使得樣本量減少90%以上，同時每份樣本的檢測時間從120s降低至10s"。
——Bruce K. Patterson 個展開個體化治療研發的
Invirion診斷公司與Evanston西北健康公司和斯坦福大學醫學院的一項以宮頸癌檢測的聯合研究報告中提到（見文獻）
“目前為止，很少有研究者對同一只小鼠進行縱向的疾病進程跟蹤研究，這是因為傳統的流式細胞儀
無法支持超微樣本量的檢測。Guava微流式細胞分析儀使得對慢性免疫疾病發展進行縱向跟蹤的實驗設計成為現實" 。
——美國運動醫學專家，MED SCI SPORT EXER雜志評委，
休斯頓大學生理學教授Dr. McFarlin在Immunology Method發表論文提到。（見文獻）
以較為常見的T淋巴細胞亞群檢測為例
T淋巴細胞亞群在許多臨床疾病中可發生異常改變，特別是免疫功能受損的病人。測定T淋巴細胞亞群變化
對了解疾病的發病機制、指導臨床治療、控制疾病的發生發展均有重要意義。根據不同的表面標志物可以
對T細胞進行分群，其中CD3+/CD4+為輔助性T細胞，CD3+/CD8+為殺傷性T細胞。使用流式細胞儀和熒
光標記抗體，可以對人全血標本中T細胞CD3/CD4進行分群和計數。
實驗流程
在96孔板中加入10ul CD8-FITC/CD4-PE/CD3-PECY5 預混試劑，或者根據抗體說明書加入相應體積抗體；
在每孔中加入10ul抗凝全血（約1×105細胞）；
用槍頭上下吹打混勻試劑和全血（確保沒有血樣粘附在孔壁上影響實驗結果）；
室溫（18-25℃）避光孵育20min；
每孔中加入180ul 1X Lysing Solution或相應體積的裂解試劑；
立即用槍頭上下吹打混勻每孔；
室溫（18-25℃）避光孵育15min；
盡快用流式細胞儀獲取結果（3h內進行檢測）
結果可見：通過CD3,CD4,CD8的檢測指標對全血樣本中T淋巴細胞進行正確區分，并同時報告Th細胞和Tc細胞的計數結果。
證明10μl的樣本借助“guava微流式"技術同樣能夠完成流式檢測，并且所獲得的數據具有統計學意義，準確區分了T淋巴細胞各個亞群。
*引用對應文獻
1 Polina, R., et al., Rapid, high throughput determination of cervical cytology specimen adequacy using a capillary-based cytometer.
Cytometry B Clin Cytom, 2008. 74(2): p. 133-6.
2 Breslin., W.L., et al., Mouse blood monocytes: Standardizing their identification and analysis using CD115
.Journal of Immunological Methods, 2011.
