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上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營產(chǎn)品： 氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計(jì) |
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快速相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜分析血清中的da麻素和苯bing胺類藥物
2023-4-7 閱讀(138)
引言在美國和歐洲 ，da麻是最常見的濫用藥物 。而且像ben丙胺化合物的類交感神經(jīng)藥物的濫用程度在過去幾年大幅增加 。由此導(dǎo)致越來越嚴(yán)重的交通安全問題 。針對這個(gè)問題 ，在 1998 年德國道路交通法將對服用da麻素 ，以及它們的亞甲基二氧基衍生物 ，MDMA 及 MDE 之后駕駛的行為進(jìn)行處罰 。自此之后 ，血液中四氫da麻酚(THC)或ben丙胺的檢測量快速增加 。因此 ，各實(shí)驗(yàn)室迫切需要能夠快速分析大量樣品的方法及手段 。液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜是最合適的技術(shù) 。ben丙胺是一種堿性化合物 ，特別是電噴霧離子化的模式 ，而極性較弱的da麻素則在大氣壓化學(xué)電離源模式下具有較好的靈敏度（見圖 1）。為了實(shí)現(xiàn)在一次進(jìn)樣就可分析兩種化合物 ，使用安捷倫組合離子源(G1978B)以實(shí)現(xiàn)所有的分析目的 。組合源可以單獨(dú)進(jìn)行電噴霧 ，大氣壓化學(xué)源或者兩種模式同時(shí)進(jìn)行 。模式和參數(shù)也可以時(shí)間編程 。
試劑所有的溶劑和試劑都是分析純 。甲醇 ，丙酮 ，醋酸 ，二氯甲烷 ，異丙醇和氨水來自默克公司 。固相萃取柱采用 Baker 公司 ，所有的藥物標(biāo)準(zhǔn)品和氘代標(biāo)準(zhǔn)品來自 Cerilliant (Austin, TX)。
樣品制備1 毫升的血清 ，用 6 毫升磷酸緩沖液(0.1 M, pH 6)稀釋 。加入 50 微升內(nèi)標(biāo)混合液（濃度為 ，每微升含1ng 的 D5-MDA,D5-MDMA, D6-MDE 和 D9-THC-COOH 與 D3-THC 和D3-THC-OH) 每種 0.1 ng/µL 。溶液混合 3 分鐘 ，然后在 3000 轉(zhuǎn)下離心 10 分鐘 。固相萃取系統(tǒng)可以采用自動(dòng)化 ，如 Caliper Rapid- Trace SPE 工作臺(tái) ，或者手動(dòng)系統(tǒng) 。上清液加入預(yù)先活化的萃取柱(Bakerbond SPE C18,500 mg),活化步驟是先用 3 毫升甲醇沖洗兩次 ，然后用 2 毫升水沖洗一次備用 。樣品溶液經(jīng)過之后 ，用水淋洗兩次 ，再用 80:20; v/v 的水/甲醇淋洗兩次 ，最后用 0.1M 甲酸溶液淋洗一次 。萃取柱干燥10 分鐘 。洗脫分兩步 。首先用 3 毫升的 50:50; v/v 的二氯甲烷/丙酮將da麻素洗脫出來 ，然后用 40:10:2; v/v/v的二氯甲烷/異丙醇/氨水將苯bing胺 ，阿片 ，以及代謝物洗脫出來 。將兩個(gè)洗脫液合在一起 ，在 30 °C 下氮?dú)獯蹈?，用 100 微升甲醇再溶 。最后用水稀釋(1:4),以改善色譜峰形 。
液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)包括 1200 高分離度快速液相色譜(RRLC)和 6410 串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀 。不同的流動(dòng)相 ，流速 ，色譜柱參數(shù)來篩選適合的 ZORBAX 的色譜柱以獲得最佳的分離度和最快的分析速度 。
方法認(rèn)證液相/質(zhì)譜/質(zhì)譜方法驗(yàn)證用血清中 THC, THC-OH,THC-COOH, MDA, MDMA 和MDE 的定性和定量來完成 。驗(yàn)證程序根據(jù) Peter[1]和德國毒物及法醫(yī)化學(xué)協(xié)會(huì)的相關(guān)規(guī)定和方法進(jìn)行 。在方法驗(yàn)證中使用基于微軟 Excel 的驗(yàn)證程序(VALSTAT[2])。不含藥物的血清作為空白基質(zhì)用于方法驗(yàn)證 。采用 7 點(diǎn)校正曲線 。每個(gè)水平都是空白血清加 50 微升含藥物的甲醇溶液 。校正曲線見表 4。
7 點(diǎn)校正曲線 ，其中每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)重復(fù)六次 。校正曲線采用線性模式 ，對于大多數(shù)的化合物其相關(guān)系數(shù)大于 0.99。以第三個(gè)校正點(diǎn)的信噪比計(jì)算出定量限（峰-峰比 ）。所有的定量離子和定性離子都被準(zhǔn)確地測量 ，即使為了提高峰形而采用1:4 的水稀釋樣品 ，其具有很好的信噪比（見圖 4）。日內(nèi)測定和日間分析結(jié)果精密度是在以下條件進(jìn)行的 ：兩個(gè)濃度水平（低 ，高濃度 ）在八天數(shù)據(jù)的結(jié)果計(jì)算而得 。日內(nèi)測定的精密度是從一天之內(nèi)兩個(gè)濃度水平的樣品八次結(jié)果的變異系數(shù)計(jì)算得出 。日間測定精密度是從八天測得結(jié)果的平均值 。日內(nèi)測定精密度在 2.9-15.3% 之間（表 5）。日間測定精密度在 3.4-15.3% 之間 。
結(jié)論使用 1.8 µm 粒徑色譜柱的液相分離（12 分鐘 ），獲得了比氣質(zhì)聯(lián)用分析更快的分析速度（45 分鐘 ）。由于兩類化合物的極性不同 ，因此采用了組合離子源以使每個(gè)化合物都獲得最佳的相應(yīng)（利用時(shí)間編程進(jìn)行采集模式切換 ）。與現(xiàn)有的氣質(zhì)聯(lián)用分析方法相比 ， 高分離度快速液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)可以獲得更高的靈敏度和選擇性（對于氣質(zhì)分析 ，進(jìn)樣體積一般是 1 微升 ，而液質(zhì)分析的條件是 ：樣品在進(jìn)樣前稀釋 4 倍 ，進(jìn)樣體積是 10 微升 ）。日間和日內(nèi)測定精密度也很好 ，變異系數(shù)在 3-15%之間 ，而且大多數(shù)的化合物的精密度在 5-10%之間 。其它的濫用藥物也將被包括在此液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜方法里 。其中在線固相萃取也將被評價(jià) 。
