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上海西格生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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凍存細(xì)胞使用操作過(guò)程

時(shí)間:2024/3/4閱讀:136
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凍存細(xì)胞是一種通過(guò)低溫技術(shù)保存細(xì)胞活性的方法,使細(xì)胞在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)能夠保持其生物學(xué)特性不變。凍存細(xì)胞使用操作過(guò)程:

1、收到快遞后,若發(fā)現(xiàn)凍存管破損、箱內(nèi)已無(wú)干冰,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系供貨商。

2、收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快復(fù)蘇,給凍存管(外觀×1張)拍照留存,隔天在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),給細(xì)胞(100倍×2張,200倍×2張)拍照,售后時(shí)需提供。

3、復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)不可直接將凍存管丟進(jìn)水浴鍋,用鑷子夾住凍存管頂部,將凍存管下部浸入水中即可,由于水浴鍋處于實(shí)驗(yàn)室暴露、高溫、濕潤(rùn)環(huán)境,極易滋生各種微生物,建議在水浴鍋中加入Deeming水浴鍋安全衛(wèi)士抑制各類微生物的滋生,大程度上防止水浴鍋中的微生物對(duì)凍存細(xì)胞造成的污染。

4、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,凍存管、試劑、耗材拿進(jìn)去之前一定要用75%酒精消毒,培養(yǎng)試劑盡量不要共用,若有共用試劑,建議配成完培后整體過(guò)濾除菌。

5、原代細(xì)胞傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,保種1支,另外1支傳代至T25新瓶,前面代次建議代代保種,以妨出現(xiàn)問(wèn)題后無(wú)種可用,原代細(xì)胞需根據(jù)生長(zhǎng)狀況判斷傳代比例。

6、第一次傳代時(shí)需要摸索消化時(shí)間,建議每隔30s就觀察一次,并記錄消化時(shí)間,細(xì)胞會(huì)隨著后期傳代次數(shù)的增多而延長(zhǎng)消化時(shí)間。

7、由于細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中失去原有適宜的生長(zhǎng)條件且長(zhǎng)時(shí)間顛簸,收到細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇后,前1-2代培養(yǎng)可適當(dāng)提高血清含量以促進(jìn)恢復(fù)細(xì)胞原有狀態(tài)并縮短到達(dá)對(duì)數(shù)期的時(shí)間。

8、原代細(xì)胞建議選用廠家供應(yīng)的專用培養(yǎng)基,否則可能會(huì)因?yàn)楦淖兣囵B(yǎng)條件,大大縮短細(xì)胞的培養(yǎng)代數(shù),造成種子細(xì)胞的浪費(fèi)。

9、及時(shí)更換和補(bǔ)充培養(yǎng)箱水盤內(nèi)的水,建議加入Deeming細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤安全衛(wèi)士進(jìn)行污染物的預(yù)防。

10、 購(gòu)買的細(xì)胞只可用于科研,不得應(yīng)用于人體。


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