日韩欧美一区二区三区免费观看_精品国产欧美一区二区_波多野结衣乱码中文字幕_最新无码国产在线视频2021

上海西格生物科技有限公司
初級會員 | 第6年

18930344717

聚合酶鏈?zhǔn)剑≒CR)反應(yīng)一般過程

時間:2024/10/9閱讀:116
分享:

PCR( Polymerase Chain Reaction)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),PCR原理DNA雙鏈復(fù)制,DNA雙鏈結(jié)構(gòu)高溫氫鍵斷裂。目的是在生物體外大量擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),其特點是可以以微量的DNA為模板,快速擴(kuò)增得到大量拷貝。

PCR反應(yīng)過程:
1、變性:利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA解螺旋,高溫使兩條DNA鏈間的氫鍵斷裂。在第一個循環(huán)之前,通常加熱時間較長以確保模板DNA全分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來機(jī)器就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。
2、退火:將反應(yīng)溫度降低至50-65℃(通常比引物 值低3-5℃)持續(xù)20-40s,從而使引物結(jié)合于單鏈DNA上。若退火溫度過低,容易造成非特異擴(kuò)增,而退火溫度過高,引物可能根本不結(jié)合。
3、延伸:此步驟的溫度取決于所用的DNA聚合酶。 Taq(Thermus aquaticus)聚合酶的熱穩(wěn)定DNA聚合酶的最佳活性溫度約為75–80°C,但通常使用的延伸溫度為72°C。 在這一步驟中,DNA聚合酶通過從反應(yīng)體系中添加的5'至3'方向的游離dNTP,從而合成與DNA模板鏈互補(bǔ)的新DNA鏈。延伸所需的精確時間取決于所用的DNA聚合酶和待擴(kuò)增的DNA片段的長度。 傳統(tǒng)的Taq 酶估計合成1000bp大概需要1分鐘、較新的Tbr 酶(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40s、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15s。有修正功能的則會比較慢。
上述循環(huán)結(jié)束后,將進(jìn)入終延伸階段:此步驟是可選的,但要在70-74°C)(PCR中使用的大多數(shù)聚合酶最佳活性所需的溫度范圍)下進(jìn)行5-15分鐘。
4、循環(huán):
以確保所有剩余的單鏈DNA的岡崎片段被補(bǔ)齊。
最終保持:最后一步將PCR儀反應(yīng)室無限期地冷卻至4–15°C,可用于PCR產(chǎn)物的短期保存。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 马山县| 宕昌县| 彭山县| 花莲市| 龙门县| 邓州市| 平顺县| 浏阳市| 佛山市| 扎赉特旗| 建宁县| 博野县| 曲沃县| 平遥县| 玉环县| 云安县| 岳阳县| 茶陵县| 衡阳县| 赤城县| 勃利县| 北辰区| 丰台区| 盐亭县| 班戈县| 阿坝| 沾化县| 黄平县| 林芝县| 同仁县| 浦东新区| 呼图壁县| 广丰县| 宁波市| 阿鲁科尔沁旗| 泾阳县| 马尔康县| 岳池县| 怀来县| 瑞昌市| 东乡族自治县|