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大鼠檢測試劑盒原理與操作步驟

時間:2021/1/6閱讀:401
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大鼠檢測試劑盒實驗原理:

大鼠檢測試劑盒實驗原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被目標物抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標物呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

大鼠檢測試劑盒注意事項:

1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。

2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。

3. 次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。

5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數。

6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。

7. 底物請避光保存。

8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

大鼠檢測試劑盒操作步驟:

1. 取出大鼠LPS檢測試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。

2. 分組:取出 96 孔板,根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組(6 個濃度)、空白孔、待測樣品組。

3. 加樣:依照標準品的順序分別加入 100ul 的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入 100ul 的蒸餾水;其余微孔中加入100ul 的待測樣本。

4. 加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入 50ul 的酶標溶液(空白對照孔除外)。

5. 溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時。

6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置 15-30s,充分清洗酶標板 5 次,用吸水紙*拍干。

7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止:25-37℃下避光反應 10-15 分鐘,加入 50ul 終止液。

9. 讀板:在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。

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