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小鼠脈絡膜血管細胞提取物【Mouse Choroid: Normal Choroidal Vascular Cells Derivatives】
小鼠脈絡膜血管細胞提取物是從小鼠原代脈絡膜血管細胞提取的,小鼠原代脈絡膜血管細胞從正常小鼠脈絡膜組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠脈絡膜血管組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產品名稱 | 小鼠脈絡膜血管細胞提取物 |
規格 | 詳見說明書 |
貨號 | XG-X6813 |
培養步驟:
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
tert-Butyl hydroquinone定制混標22 標準品anti- HEBP1 antibody速激肽受體2(TACR2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
tert-Butyl lithiuM26種混標 標準品anti- HEBP2 antibody釋放激素(GnRH)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
tert-Butylbenzene;TriMethyl-phenylMethane;Pseudobutylbenzene;ω-TriMethyltoluene;2-Phenylisobutane;(1,1-DiMethylethyl)benzene7種PCB混標(28,52,101,118,138,153,180)(Hanti- HECTD1 antibodyGATA結合蛋白2(GATA2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
tert-ButyldiMethylsilyl trifluoroMethanesulfonate;TrifluoroMethanesulfonic acid tert-butyldiMethylsilyl ester;TBDMS triflateEPA 8080/8270殺蟲劑替代混標 標準品anti- HECTD2 antibodyGATA結合蛋白2(GATA2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
TetrabroMophenolphthalein ethylester potassiuM salt;TBPEEPA 8080/8270殺蟲劑替代混標 標準品anti- HECTD3 antibody蛋白激酶抑制因子β(PKIβ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Tetrabutylammonium phosphateDBC and TCMX Solution 標準品anti- HELB antibody蛋白激酶抑制因子β(PKIβ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
TetrabutylaMMoniuM borohydride;Custom 8321 Pesticide Mix 標準品anti- HELLS antibody解整合素金屬蛋白酶8(ADAM8)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
TetrabutylaMMoniuMhydrogen sulfate定制混標87 標準品anti- HELT antibody解整合素金屬蛋白酶8(ADAM8)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
小鼠脈絡膜血管細胞提取物Colletotrichum gloeosporioides (Penzig) Pen ..熱休克蛋白105抗體Bovine DAO(Diamine Oxidase) ELISA Kit微管蛋白β4(TUBβ4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Mycobacterium fortuitum subsp.fortuitum ..熱休克轉錄因子2抗體Bovine PTGES(Prostaglandin E synthase) ELISA Kit微管蛋白α8(TUBα8)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
freeze-dried肝細胞核因子1α抗體Bovine Jun(Jun Proto-Oncogene) ELISA Kit微管蛋白δ(TUBδ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Neofabraea perennans Kienholz, teleomorph缺氧誘導因子1β 抗體Bovine FG(Fibrinogen) ELISA Kit微管蛋白ε(TUBε)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..型肝炎表面抗原單克隆抗體(檢測)Bovine OC(Osteocalcin) ELISA Kit微管蛋白γ1(TUBγ1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..型肝炎e抗原單克?。ò唬┛贵wBovine PaRathyroid hormone ELISA Kit微管蛋白γ2(TUBγ2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Homo sapiens, human型肝炎e抗原單克隆(檢測)抗體Bovine ALOX12(Arachidonate-12-Lipoxygenase) ELISA Kitτ-微管蛋白激酶2(tTBK2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Botrytis aclada Fresenius, anamorph絨毛膜α 亞基單抗Bovine ApoB100(Apolipoprotein B100) ELISA Kit前折疊蛋白亞基6(PFDN6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
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