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小鼠淋巴成纖維細胞提取物

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所  在  地上海市

更新時間:2020-10-23 13:24:06瀏覽次數:149次

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小鼠淋巴成纖維細胞提取物
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 小鼠淋巴成纖維細胞提取物

 詳見說明書

XG-X6793

小鼠淋巴成纖維細胞提取物【Mouse lymphoid: Normal lymphoid Derivatives】
小鼠淋巴成纖維細胞提取物是從小鼠原代淋巴成纖維細胞提取的,小鼠原代淋巴成纖維細胞從正常小鼠淋巴組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠淋巴成纖維組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。

 

冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。

收到細胞如何處理?

1、首先,觀察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續服務依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時,以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養瓶內培養基,預留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養,補加培養基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
公司產品采用干冰運輸,經過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

PotassiuM tartrate;Soluble tartar7種混標 標準品anti- GRP94 antibody神經型一氮合酶()檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

PotassiuM thiocyanate;PotassiuM rhodanide;PotassiuM sulfocyanide;Rhocya8種混標 標準品anti- GRPEL1 antibody內皮型一氮合酶(NOS3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

PotassiuM thiosulfate定制有機混標(9組份)標準品anti- GRWD1 antibody內皮型一氮合酶(NOS3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

PotassiuM titanyl oxalate;PotassiuM oxodioxalatodiaquotitanate(Ⅳ);Titanyl potassiuM oxalate12種有機混標(2015中國藥典)標準品anti- GS28 antibodyC反應蛋白(CRP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

PotassiuM tungstate定制菊酯混標(5份) 標準品anti- GSDMB antibodyα1-酸性糖蛋白(α1AGP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

p-Phthalaldehyde;Terephthaldialdehyde;Terephthaldicarboxaldehyde;Benzene-1,4-dialdehyde;Benzene-1,4-dicarboxaldehyde;1,4-Dialdehydobenzene;1,4-DiforMylbenzene定制混標(5組分)標準品anti- GSDMD antibodyα1-酸性糖蛋白(α1AGP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

p-Phthalic acid;Benzene-1,4-dicarboxylic acid;Tephthol定制混標(5組分)標準品anti- GSG1L antibodyα1-酸性糖蛋白(α1AGP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

p-Phthaloyl chloride;Terephthalic chloride;1,4-Benzenedicarbonyl chloride定制混標(24組分) 標準品anti- GSK3A antibodyα1-酸性糖蛋白(α1AGP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

小鼠淋巴成纖維細胞提取物Streptomyces griseochromogenes Fukunaga et ..舞蹈癥相關相互作用蛋白1/雌激素相關受體樣蛋白1抗體AP-conjugated Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)松弛肽2(RLN2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Stanieria sp.舞蹈癥蛋白相互作用蛋白13抗體AP-conjugated Affinipure Donkey Anti-Goat IgG (H+L)松弛肽3(RLN3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

freeze-dried神經性舞蹈病蛋白抗體AP-conjugated Affinipure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)二肽基肽酶3(DPP3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

dried舞蹈癥相關蛋白1抗體AP-conjugated Affinipure Donkey Anti- Rabbit IgG (H+L)二肽基肽酶7(DPP7)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Pseudomonas chlororaphis (Guignard and Sauv ..亨廷頓(舞蹈癥)相互作用蛋白1抗體AP-conjugated Affinipure Donkey Anti- Rat IgG (H+L)二肽基肽酶8(DPP8)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..β氨基己糖苷酶A抗體AP-conjugated Affinipure Donkey Anti-Human IgG (H+L)胞漿-5',3'-核苷酸酶(NT5C)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..轉錄調節因子HOXD9抗體AP-conjugated Affinipure Goat Anti-Human IgG (H+L)線粒體-5'-核苷酸酶(NT5M)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..轉錄因子HELT蛋白抗體AP-conjugated Affinipure Goat Anti- Rat IgG (H+L)3',5'-二酸核苷酸酶1(BPNT1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

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