收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續服務依據）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

小鼠腦靜脈血管內皮細胞提取物【Mouse Brain: Normal Cerebral Venous Vascular Endothelial CellsDerivatives】
小鼠腦靜脈血管內皮細胞提取物是從小鼠原代腦靜脈血管內皮細胞提取的，小鼠原代腦靜脈血管內皮細胞從正常小鼠腦組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠腦靜脈血管內皮組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞培養步驟：

一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

Tetrapropylammonium bromide十氯聯苯和四氯間二苯 標準品anti- HES5 antibodyBH3相互作用域死亡激動劑(Bid)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

TheobroMine;3,7-DiMethylxanthine20種有機氯混標(適用于EPA 508/525/625/8081/827anti- HESX1 antibodyBH3相互作用域死亡激動劑(Bid)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

ThiaMine Hydrochloride;VitaMin B1 Hydrochloride;VitaMin B1 hydrochloride;Betabion hydrochloride16種混標 標準品anti- HEXA antibody胱天蛋白酶5(CASP5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

ThiMerosal;ThiMerosal;ThioMersalate;[(o-Carboxyphenyl)thio]ethylMercury sodiuM salt;Mercurothiolate氘代吡啶（D5）、氘代苯烯(D8)、氘代喹啉(D7)定制混標 標準品anti- HEXA antibody趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

ThioacetaMide;EthanethioaMide酚類混標(由126502-03分裝）標準品anti- HEXB antibody趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Thioacetic acid;Ethanethioic acid;Thiacetic acid4種酚類混標 標準品anti- HEXIM1 antibody趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Thionin;Thionine;Thionine chloride;3,7-DiaMinophenothiazin-5-iuM chloride;7-AMino-3-iMino-3H-phenothiazine hydrochloride;C.I. 52000異戊二烯、烯腈、苯、苯混合 標準品anti- HEXIM2 antibody糖原合酶激酶3α(GSK3α)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Thiosalicylic acid;o-Sulfhydrylbenzoic acid氘代苯（D6） 標準品anti- Hexokinase 1 antibody糖原合酶激酶3α(GSK3α)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

小鼠腦靜脈血管內皮細胞提取物Aspergillus awamori Nakazawa, anamorph組蛋白去酰化酶4抗體Bovine Gastrin(gastrin-34) ELISA Kit輸入蛋白11(IPO11)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Lentinula edodes (Berkeley) Pegler, teleomo ..酸化組蛋白去酰化酶8抗體Bovine BMP-7(Bone morphogenetic protein 7) ELISA Kit輸入蛋白13(IPO13)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human組蛋白去酰化酶6抗體Bovine Angiotensin II(Angiotensin II) ELISA Kit耐扭蛋白2A(TOR2A)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..酸化組蛋白去酰化酶6抗體Bovine ADH(Antidiuretic Hormone) ELISA Kit白介素22受體(IL2R)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Acinetobacter baumannii Bouvet and Grimont組蛋白去酰化酶7抗體Bovine FST(Follistatin) ELISA Kit膜聯蛋白A9(ANXA9)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..組蛋白去酰化酶8抗體Bovine MPO(myeloperoxidase) ELISA Kit膜聯蛋白A10(ANXA10)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

frozenHOXB4抗體Bovine MMP13(Matrix Metalloproteinase 13) ELISA Kit膜聯蛋白A7(ANXA7)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..組蛋白去酰化酶9抗體Bovine GM-CSF(Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor) ELISA Kit膜聯蛋白A13(ANXA13)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

公司產品采用干冰運輸，經過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時停止其生命活動，保存其活性，使您的實驗更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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