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上海達為科生物科技有限公司
細胞劃痕法是簡單易行的檢測腫瘤細胞運動特性的方法之一。其借鑒體外細胞致傷愈合實驗模型,在體外培養的單層細胞上,劃痕致傷,然后加入藥物或者通過過表達或者干擾其基因表達觀察其抑制腫瘤細胞遷移的能力。
細胞劃痕介紹:
細胞劃痕是一種簡單易行的檢測細胞運動的方法,實驗成本低,可以用來檢測貼壁生長腫瘤細胞的侵襲轉移能力。
細胞劃痕內容:
材料:6 孔板(其他的也可以,但感覺6孔比較好,大小適中)、marker筆直尺、20微升槍頭(滅菌)、無血清培養基、PBS
步驟:能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內)
1.先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻得劃橫線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
2.在空中加入約5X105個細胞,具體數量因細胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿。
3.第二天用槍頭比著直尺,盡量垂至于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不能傾斜。
4.用PBS洗細胞3次,去處劃下的細胞,加入無血清培養基。
5.放入37度5%co2培養箱,培養。按0,6,12,24小時取樣,拍照。
細胞劃痕注意事項:
一般做劃痕實驗,都是在無血清或者底血清狀態下培養的,否則細胞增殖就不能忽略。
按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕,可以形成若干交叉點,作為固定的檢測點,這就解決了前后觀察時位置不固定的問題。
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