1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr；石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化： 切片經下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O 洗2×2min；
4.抗原修復： 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫度達到98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗2×2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復方法見附1）* 注：有些抗原勿需修復，直接進入第5 步封閉。
5.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉： 滴加試劑Tween 20，37℃濕盒孵育封閉20 min；
12.加HRP-SA： 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20 nM），
37℃濕盒中孵育30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應用DAB 溶液（試劑F）顯色；
15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；
16.封片： 待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。
磷酸化有絲分裂激酶B/C抗體
磷酸化腺泡Acinus蛋白抗體
磷酸化腎上腺素能受體β2抗體
APS抗體
激活素受體樣激酶1抗體
激活素A受體1B抗體
磷酸化雄激素受體抗體
磷酸化A-Raf抗體
酰基鞘氨醇脫酰酶2抗體
脂肪細胞特異性粘附分子抗體
腺相關病毒5抗體
腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體
腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2抗體
磷酸化細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體
細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體
磷酸化蛋白激酶B2抗體
磷酸化鐵蛋白Fe65抗體
磷酸化鐵蛋白Fe65抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
磷酸化活化復制因子2抗體
磷酸化活化復制因子2抗體
磷酸化細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體
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