日韩欧美一区二区三区免费观看_精品国产欧美一区二区_波多野结衣乱码中文字幕_最新无码国产在线视频2021

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

人腹膜毛細血管內皮細胞*培養基人胚肺成纖維樣細胞（男）

宇佐美曲霉 Aspergillus usamii中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii

大鼠神經小膠質細胞*培養基100mL

胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎/Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base蠟樣芽孢桿菌的溶血測試驗250克國產/進口

霍亂雙糖鐵瓊脂/KIA/Kligler Iron Agar用于霍亂、副溶弧菌的分離培養250克國產/進口

Super-Bradford蛋白定量試劑盒200ml國產

猴胚胎腎上細胞英文名稱：Marc145

木耳 Auricularia auriculaHep-2, 人喉細胞系

NCI-H716(人結直腸腺細胞)植物桿菌 Lactobacillus plantarum

大鼠腸平滑肌細胞*培養基100mL

髓細胞觸發受體1(TREM1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Triggering Receptor Expressed On Myeloid Cells 1 (TREM1)

腦胞內原蟲屬通用·PCR檢測試劑盒規格植物桿菌 Lactobacillus plantarum熱帶假絲酵母 Candida tropicalis

苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti盾形木耳 Auricularia peltata

OK(負鼠腎小管細胞)小鼠腎小管平滑肌細胞*培養基

嗜松青霉 Penicillium pinophilum皺狀假絲酵母 Candida versatilis

大豆慢生根瘤菌HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內皮細胞)

人結直腸腺細胞粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae香菇 Lentinula edodes

固囊酵母 Trichoderma longibrachiatum人內膜腺細胞

蘇云金芽胞桿菌巴基斯坦亞種 Bacillus thuringiensis subsp. pakistani人胎盤滋養層細胞*培養基

小鼠氣管平滑肌細胞*培養基康寧木霉 Trichoderma koningii

香菇 Lentinula edodes枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis

香菇 Lentinula edodesH4(人腦神經膠質瘤細胞)

30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液(29:1)釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

藤倉赤霉 Gibberella fujikuroi爪哇根霉

苜蓿中華根瘤菌人腎透細胞皮膚轉移細胞

rCSC, 大鼠心肌細胞U-2 OS, 人骨瘤細胞